珠子参皂苷联合5-fu对人宫颈癌caski细胞的作用研究

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1、分类号R392密级公开UDC硕士学位论文珠子参皂苷联合5-FU对人宫颈癌caski细胞的作用研究学位申请人：杨倩倩学科专业：免疫学指导教师：骆社丹副教授朱晓宣教授二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineStudyofPanaxJaponicsSaponincombinedwith5-FuonhumancervicalcancerCaskiCellGraduateStudent:YangQianqianMajor

2、:ImmunologySupervisor:Prof.LuoShedanProf.ZhuXiaoxuanChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡

3、大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：探讨珠子参皂苷(PJ)单独及其与5-氟尿嘧啶（5-FU）联合

4、应用对人宫颈癌caski细胞诱导其凋亡的作用，为临床上联合应用珠子参皂苷和5-FU治疗宫颈癌提供实验依据。方法：(1)取珠子参生药材，以醇提法制备珠子参皂苷粉末。(2)体外培养人颈鳞癌Caski细胞系细胞，用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的5-FU、珠子参以及合用在作用24、48及72h对caski细胞增殖的影响以及倒置相差显微镜观察细胞形态的变化。(3)选择适宜浓度的PJ、5-FU及PJ与5-FU的合用组作用于Caski细胞，电镜下观察caski细胞形态的变化。(4)qPCR检测不同药物处理后抑癌基因p53，p21与癌基因c-myc,c-fos的表达

5、情况。(5)Westernblot检测PJ、5-FU及PJ与5-FU的合用处理后p53，p21蛋白及c-myc,c-fos蛋白的表达情况。结果：(1)MTT比色法显示：PJ能抑制caski细胞的增殖，PJ和5-FU合用能增强单药对caski细胞的增殖抑制作用。(2)通过透射电子显微镜观察发现：PJ可明显抑制宫颈癌caski细胞的生长，细胞出现细胞膜微绒毛减少或消失，细胞活跃度明显下降，细胞内出现凋亡小体，PJ与5-FU合用组抑制caski细胞生长作用最明显，凋亡细胞增多，出现凋亡晚期的蟹爪状细胞，整体凋亡细胞比例增加。(3)qPCR法结果显示：PJ可上调抑癌基

6、因p53，p21的表达，下调癌基因c-myc,c-fos的表达；与5-FU组相比，PJ和5-FU合用组在上调抑癌基因p53，p21的表达，下调癌基因c-myc,c-fos表达的作用更加明显。（4）Westernblot结果表明：PJ可上调p53蛋白的表达，显著上调p21蛋白的表达，显著下调c-myc,c-fos蛋白的表达；与5-FU组相比，PJ和5-FU合用组在上调p53，p21蛋白，下调c-myc,c-fos蛋白表达上的作用更加明显。结论：本实验所选用剂量的PJ对人宫颈癌caski细胞有明显抑制增殖的作用，进一步证明了PJ在体外可抑制肿瘤细胞生长。PJ与5-

7、FU合用能增强5-FU对caski细胞的增殖抑制作用，PJ与5-FU合用可诱导人宫颈癌caski细胞的凋亡，表明PJ可增强5-FU对人宫颈癌的抑制作用及诱导凋亡的作用。PJ与5-FU合用可能通过影响caski细胞DNA合成，改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用，其分子机制可能与上调p53,p21的表达，下调c-myc,c-fos的表达有关。本研究结果提示了PJ抑制肿瘤细胞生长的作用及与化疗药物5-FU合用的增效作用。可在此基础上进一步探讨PJ及PJ与5-FU合用上调p53、p21，下调c-myc、c-fos的mRNA及蛋白表达相关的调控途径和机制

8、。关键词：珠子参5-FU宫颈癌细胞凋亡