辛伐他丁减少connexin43表达和兔粥样硬化斑块形成论文

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1、辛伐他丁减少Connexin43表达和兔粥样硬化斑块形成论文李建军，林宏，李柱一，李宏增【关键词】动脉粥样硬化SimvastatinreducesConnexin43expressionandinhibitsrabbitatheroscleroticlesionformation【Abstract】AIM:Todemonstratethatsimvastatincaninfluenceatheroscleroticplaqueformationandstabilitybydecreasingtheexpressionofgapjunctionpro

2、teinconnexin43(Cx43)inatheroscleroticlesions.METHODS:TheroleofCx43inatherogenesisinedbyapharmacologicalapproach.Therabbitmodelofatherogenesisacrophagesinvivoinedbyimmunohistochemistryandtheexpressionofconnexin43inculturedsmoothmusclecellsinedages.RESULTS:GCoAreductaseinhibitor

3、s,or"statins",lipidloaryhumanvascularcellsinvitro.Atheromaofrabbitsorallytreatedvastatincontainedfematorycellsandexhibitedthickerfibrouscapsthancontrols,ediatedgapjunctionalmunicationinatheroscleroticplaqueformation.ReducedCx43mediatedintercellularmunicationleadstochangesinath

4、erogenesis.Thesefindingsshoediatedintercellularmunicationcanbeusedasanevastatin;Connexin43【摘要】目的：证明辛伐他丁可以通过减少缝隙连接蛋白43（Connexin43,Cx43）的表达影响粥样斑块的形成及稳定性.方法：高脂饲料喂养建立粥样硬化模型，治疗组给予辛伐他丁口服，活体内的Cx43和巨嗜细胞检测使用免疫组织化学方法，培养平滑肌细胞的Cx43检测使用免疫印记方法，Cx43的半定量使用计算机图像处理.结果：药物干预的培养细胞和模型治疗组中Cx43的表达均明显

5、减少.freelo龄健康新西兰兔20只,购自第四军医大学实验动物中心，体质量2～3kg，适应性喂养1g/(kgd)淀粉.第二组除给予高胆固醇饮食外，给予辛伐他丁(湖北丝宝药业)4mg/(kgd).两组均单笼饲养，自由饮水.12g/kg，Sigma公司）40g/L多聚甲醛灌注，取兔主动脉，进行形态学和免疫学分析.血浆总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）的水平分别采用酶法在日立7170A型生化分析仪上进行测定.1.2.1组织形态学观察及定量分析主动脉被分成两部分，主动脉根部及弓部包埋剂包埋，冰冻切片.粥样硬化程度的评估采用

6、采用计算机图像分析系统，计算6个相距50μm的切片层面的脂质沉积面积（苏丹Ⅳ染色）占整个血管横截面的比例的平均数.胸腹段的血管沿着腹中线纵行剖开，苏丹Ⅳ染色，计算病变面积占总胸腹动脉总面积的百分比.1.2.2人血管平滑肌细胞培养采用本院普外科静脉曲张患者手术后切除的大隐静脉，分离培养平滑肌细胞，胎牛血清、DMEM培养基由Gibco公司提供，原代培养采用组织贴块法，培养液为200g/L胎牛血清加DMEM培养基.待细胞生长融合出现峰与谷结构后，用含1.25g/L胰蛋白酶消化液消化、传代培养.第三代细胞用抗αactin肌动蛋白抗体免疫组化法进行鉴定.于9

7、6孔板内接种每孔5000个细胞，加入终浓度为10，2，0.4和0.08μmol/L的辛伐他丁和500μmol/L甲瓦龙酸酯（Sigma）和10μmol/L辛伐他丁，继续培养48h，培养液为200g/L胎牛血清加DMEM培养基.1.2.3免疫组化染色主动脉10μm冰冻连续切片，分别加入:①抗Cx43一抗1∶200稀释（武汉博士德公司），二抗及DAB显色采用博士德公司即用型SABC试剂盒SA1022和DAB显色试剂盒AR1022.操作按照说明书;②鼠抗兔CD14mAb（标记单核巨嗜细胞）1∶500稀释（VMRD,Inc）二抗及DAB显色采用博士德公司即

8、用型SABC试剂盒SA1021和DAB显色试剂盒AR1025，操作按照说明书.1.2.4免疫蛋白印记细胞的制备、蛋白定量、