石杉碱甲对老年大鼠腹部手术术后认知功能的影响

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1、石杉碱甲对老年大鼠腹部手术术后认知功能的影响作者：徐爱丽冯勇王华周岩【摘要】目的探讨腹部手术操作对老年大鼠学习认知能力和海马CA1区胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性神经元的影响以及石杉碱甲干预的结果。方法20月龄orris水迷宫测试,将圆池内壁和平台漆成黑色，将其分为4个象限，平台置于第4象限没入水下约2cm，选择一个象限的固定位置作为大鼠入水点，通过自动图像拍摄系统记录游泳轨迹，入水至找到平台为潜伏期,其总行程为游泳距离〔3〕。术前学习5d，每天测试4次，取其平均值，术后1、3、7d分别进行测试，并于术后7d撤掉平台，记录60s内大鼠在每个象限的

2、停滞时间和在每个象限游泳的距离。　　1.4免疫组化染色　　1.4.1灌注和切片大鼠行为学观察结束后，氯胺酮(25mg/kg)腹腔麻醉动物，暴露心脏，以0.9%生理盐水经升主动脉灌注冲洗后，灌注4%多聚甲醛(pH7.4)900ml，持续2h后取脑，将脑置于20%蔗糖的PBS溶液中浸置24～48h(4℃)，冰冻冠状连续切片(厚度30μm)，海马组织每5张取1张。　　1.4.2免疫组化染色步骤切片置于0.3%Triton中浸30min，PBS液洗3次，每次15min;在稀释浓度为1∶2000的山羊抗ChAT多克隆抗体中孵育72h(4℃);PBS液漂洗后

3、在生物素标记二抗(1∶100)中,室温下孵育1h;辣根过氧化物酶标记链霉卵白素(1∶100)中,室温下孵育1h;二氨基联苯氨(DAB)反应液中成色,室温下10～20min;常规明胶裱片、脱水、DPX封片。为了计算ChAT细胞数目，采用标准网格的技术方法，在100倍的光镜下做ChAT细胞计数，以“500×400μm”为单位，结果取3个视野的平均值。　　1.5统计学方法计量资料以x±s表示，用SPSS12.0统计软件，组间比较采用单因素方差分析。　　2结果　　2.1水迷宫测试结果术后1d麻醉组、手术组的逃避潜伏期和游泳距离延长，与对照组相比均有统计学

4、意义(P<0.05);术后3d仅手术组，石杉碱甲组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)，且数值达高峰;术后7d手术组与对照组比较有差异(P<0.05),但差距已明显缩小;术后石杉碱甲组与手术组比较均有差异(P<0.05)。石杉碱甲组术前的逃避潜伏期和游泳路程较对照组有明显差异(P<0.05)，见表1。与对照组(26.5%)、麻醉组(26.3%)、石杉碱甲组(26.5%)比较，术后7d在60s内手术组(24.1%)的平台象限停滞时间百分比减小(P<0.05)，与对照组(24.5%)、麻醉组(24.2%)、石杉

5、碱甲组(24.7%)比较，术后7d在60s内手术组(22.8%)的平台象限游泳距离占总游泳距离百分比减小(P<0.05)。这些结果说明脾切除术后大鼠在水迷宫测试中的空间认知能力受到损害，单次使用氯胺酮仅引起极短期的认知减退，而石杉碱甲组减弱了脾切除术后大鼠在水迷宫测试中学习记忆能力的损害。表1各组大鼠的逃避潜伏时间、游泳路程1)与对照组比较，2)与手术组比较：P<0.05　　2.2免疫组织化学结果术后7d水迷宫测试后，海马CA1区ChAT免疫反应阳性神经元在对照组、手术组和石杉碱甲组的表达率分别是(68.17±3.02)、(80.15

6、±2.18)和(70.31±2.56)，手术组海马CA1区ChAT阳性细胞数较对照组、麻醉组(69.04±2.37)和石杉碱甲组都增多(P<0.05),而对照组、麻醉组和石杉碱甲组的ChAT阳性细胞数相当，见图1。　　3讨论　　Moller对1218例60岁以上的老年患者进行了POCD的调查研究〔4〕，发现25.8%的患者在术后1g·kg-1·d-1，均能明显增强实验动物的学习、记忆功能。因此选择石杉碱甲灌胃，0.15mg·kg-1·d-1,为确保疗效连续用药3idtRH，ScholtenKJ，MaughanPH.Timecoursefor

7、recoveryofazeperformanceandcentralcholinergicinnervationafterfluidpercussioninjury〔J〕.Neurotrauma，1999;16:113947.　　2TangXC.HuperzineA(shuangyiping);apromisingdrugforAlzhEimer′disease〔J〕.ActaPharmacologicaSinica，1996;17(6):481.　　3胡镜清，温泽淮，赖世隆.Morris水迷宫检测的记忆属性与方法学初探〔J〕.广州中医药大学

8、学报,2000;17:1179.　　4MollerJT，CluitmansP，RasmussenLS，etal.Longtermpo