微柱凝胶检测技术

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1、微柱凝胶检测技术在输血前相容性试验中的应用主要内容一、血凝试验技术发展二、在血型检测中的应用三、在抗体筛查中的应用四、在交叉配血中的应用一、血凝试验技术发展血凝实验：是指抗体和红细胞在液体介质中发生的肉眼可见的凝集反应。根据介质的不同可以分为下列5种盐水法凝聚胺法酶介质凝集试验试管抗人球蛋白法MGIA-Coombs’试验（微柱凝胶）盐水介质法是最早最简单的方法。悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。主要检测IgM类抗体（ABO系统、抗E）。盐水介质法盐水介质法结果分析：先观察有无溶血、再观察有无凝。要求：细胞浓度2～5%、血清与细胞比例、反应温

2、度、弱凝集分析优点：简便、快捷、直观、成本低。缺点：不能发现不完全抗体人为因素影响大聚凝胺试验原理：MPT法是利用阴离子溶液和聚凝胺减少红细胞表面的阳离子层及Zeta电位，促进IgG与红细胞的结合，缩短红细胞之间的距离而使红细胞凝集。聚凝胺试验+++聚凝胺+无凝集+有凝集反应-----枸橼酸纳-----聚凝胺试验优点简便快捷，可用于某些不完全抗体检测。缺点它受冷凝集、肝素等因素的影响较大灵敏度低，对抗-K漏检人为影响因素大振摇的力度和解聚的时间需要严格掌握，要求轻轻转动试管并同时观察结果，观察时间不应超过1min，弱凝集用力振摇或放置时间稍长便可能消失。试验结果需在显微镜下观察

3、，故对操作者的技术要求较高，也增加了结果判断的不确定性。聚凝胺试验凝聚胺技术在交叉配血中具有快速检出IgG抗体能力，但近年来随着对临床无效输血的深入研究发现，凝聚胺试剂对弱的、效价低的Rh血型系统的抗体有漏检的情况，且不同厂家、不同批号的凝聚胺试剂在抗体的检出率均存在一定的差异。酶介质凝集试验原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，使IgG分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集。常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶。酶介质凝集试验优点可以增强一些抗原抗体系

4、统的反应活性Rh和Kidd系统最明显。缺点会破坏一些抗原的结构(M、N、Fya、Fyb)酶液批次不同，孵育时间均不同操作复杂少数人对酶液过敏Coombs’试验人红细胞表面抗原与不完全抗体结合（常是IgG类抗体），不完全抗体致敏红细胞，由于该不完全抗体分子质量小，而且两个Fab段扩张角度小，不能使相邻红细胞桥联，红细胞仍处于分散状态，不出现肉眼可见的红细胞凝集现象。在反应体系中，加入针对该抗体的抗体，即抗-抗体，该抗-抗体Fab段结合相邻红细胞上不完全抗体Fc段，出现肉眼可见的红细胞凝集现象，该抗-抗体即称之为抗人球蛋白抗体。Coombs’试验直接Coombs’试验用于检测已粘附

5、在红细胞表面的不完全抗体。即将受检红细胞充分洗涤后，将抗球蛋白试剂加入已结合有抗体的受检红细胞悬液中，即可见细胞凝集。Coombs’试验间接Coombs’试验用于检测游离在血清中的不完全抗体。即将待测血清标本加入具有特异抗原的红细胞悬液中，如果抗原抗体相应则发生结合，再加入抗球蛋白抗体，则出现红细胞凝集Coombs’试验Coombs’试验是理论上最明确、最准确的方法，是国际公认的金标准。但是由于其繁琐的操作，又不能同时对多份标本检测，只能将该试验用在少数标本的确定中，很难临床常规开展。微柱凝胶检测技术1990年，法国人Y.Lapierre发表文章介绍了一项免疫学检测新技术：将抗

6、原抗体反应与凝胶分子筛技术相结合，即微柱凝胶免疫实验。该技术的本质是血凝试验，即红细胞抗原抗体在微柱腔内的凝胶介质中发生肉眼可见的免疫凝集反应。原理微柱凝胶免疫反应的本质是红细胞凝集试验，也可称之微柱凝胶血凝试验（MicrocolumnGelHeamagglutinationAssay，MGHA），在微柱凝胶管中，红细胞和相应抗体结合后，形成红细胞凝集团块。在一定离心力下，该凝集团块位于胶表面或胶中；而红细胞未和相应抗体结合，仍为分散的红细胞，在同样的离心力下，红细胞沉降到微柱管尖底部。广阔应用红细胞抗原抗体检测多种病原微生物检测肿瘤标志物检测神经内分泌因子检测血小板抗原抗体检

7、测MGIA应用ABO血型检测；Rh血型抗原检测；不规则抗体筛检；交叉配血；HDN检测；血小板抗体筛检；血小板交叉配血。特点及优点1.简单，不需洗涤，对阴性结果不需确证试验，解决了Coombs试验因为程序复杂费时等原因未能在临床常规应用问题。2.使不完全抗体检测理论“金标准”成为临床的“金标准”。3.多份标本一次离心出结果，有利于临床大量标本检测。4.另外还具备准确、敏感、标本用量少、结果保存时间长、易于标准化、操作更安全等优点。特点及优点结果清晰、易于判读，准确度、敏感性高，标准化加样、规范