诱导型一氧化氮合酶在动物颞下颌关节软骨组织中的定位表达

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1、诱导型一氧化氮合酶在动物颞下颌关节软骨组织中的定位表达【摘要】目的探讨颞下颌关节骨关节病(TMJOA)病变发展的不同阶段，诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在软骨组织中的表达强度及在组织中的定位。方法8只山羊分为4组。首先采用1%胶原酶注射山羊关节腔，建立TMJOA动物模型。注射胶原酶后第2、4、12、24周，分别处死2只动物。免疫组化法检测iNOS在TMJOA关节软骨组织中的表达情况。结果对照组无iNOS表达，各实验组在软骨组织中均有iNOS表达。病变中期iNOS表达强烈，提示NO与软骨的破坏有关。在病变后期，iNOS的表达逐渐变弱。结论iNOS在T

2、MJOA发生发展的过程中起着重要的作用。【关键词】颞下颌关节骨关节病诱导型一氧化氮合酶　　【Abstract】ObjectiveTodeterminethestrengthandlocationofiNOS'sexpressioningoatcollagenase-inducedosteoarthrosis.Methods8goatsporomandibularjoint(TMJ).At2,4,12,24inedimmunohisochemically.ResultsTheexpressionofiNOSiddlestageofdisease,an

3、dnoexpressioninthenormalTMJofthegoat.ConclusionsiNOSplaysanimportantroleinTMJOA'spathogenesis.　　【KeyporomandibularjointOsteoarthrosisInduciblenitricoxidesynthase　　骨关节病（Osteoarthrosis，OA），又称骨关节炎（Osteoarthritis）是系包括颞下颌关节（Temporomandibularjoint，TMJ）在内的所有滑膜关节均常见的一种非炎症性退行性病变。　　已有研究

4、证实，一氧化氮（NO）在TMJOA中起着重要的作用。人离体软骨细胞，在致炎细胞因子和（或）细菌脂多糖（LPS）刺激下，均能显著表达诱导型一氧化氮合酶（iNOS），NO的合成也显著增加。高浓度NO可促进软骨细胞凋亡，抑制软骨细胞增殖，促进软骨基质分解，产生退行性变，逐渐发展进入OA的病理过程［１］。作者自2001至2005年研究揭示TMJOA病变发展的不同阶段，iNOS在软骨组织中的表达强度及在组织中的定位。进一步探讨NO及iNOS在TMJOA发生发展过程中的作用与机制。　　1材料与方法　　1.1实验动物分组实验选用四川简阳产无角骟努比山羊9只，体重

5、15～20kg，年龄1.5～2.5岁，均属成年山羊，全部为雄性。试验前圈养1周，观察无明显全身疾患，无失牙及咬合紊乱，无关节运动异常者方纳入本实验。随机选取1只山羊作为正常对照组，不做任何处理，饲养1周后处死，取双侧TMJ关节作标本。另外8只山羊作为实验组。　　1.2建立TMJOA动物模型根据胡波，王大章等［2］方法建立，应用1%胶原酶(CollagenaseItype,SigmaU.S.A.)溶液0.8ml，分别注射入实验组8只山羊双侧TMJ关节上腔，建立实验性TMJOA动物模型。　　1.3标本获取在注射胶原酶后第2、4、12、24周分别随机选取

6、2只山羊，处死后立即行耳屏前角形切口，仔细分离，暴露关节囊，然后切取包括邻接骨组织在内的双侧关节整体标本，经修整后置入10％福尔马林PBS液中固定1周，于混合脱钙液中脱钙2周，沿关节的矢状面分别切取关节的内、中、外1/3三部分组织块，经常规处理、切片。切片厚约5μm。　　1.4免疫组织化学染色山羊TMJ组织常规石蜡包埋后切片。免疫组织化学检测采用EnVision二步法。抗体采用iNOS多克隆抗体NOS2(C－19)（SantaCruzBiotechnologyInc.）。　　2结果　　2.1在正常山羊的TMJ标本中，未见有iNOS表达。　　2.2在

7、注射胶原酶后2周的4个TMJ标本中，均可见到少量的iNOS表达，主要分布于关节凹表层，滑膜及髁状突未见有表达（图1）。　　2.3注射胶原酶后4周的标本表达强烈，关节凹、关节盘、滑膜的表层及髁状突的增殖层，在核膜及胞浆有明显棕黄色颗粒（图2，图3）。　　2.412周标本阳性细胞数多且颜色深染，阳性细胞已出现在髁状突的肥大层及钙化层，在胞膜可见到明显阳性颗粒（图4）。　　2.524周标本阳性细胞数目少于12周标本，但分布更广，仍见有大量阳性细胞集中于髁状突的增殖层。在软骨裂隙两侧的细胞有大量棕黄折光颗粒，提示iNOS与软骨的破坏有关（图5）。　　3讨论

8、　　3.1NO由NOS以L－精氨酸（L-arginine）和分子氧为底物生成。基于NOS的细胞或组织来源以及表达方式，分为