过氧化氢酶和黏附素保守区二价疫苗治疗小鼠幽门螺杆菌感染

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1、过氧化氢酶和黏附素保守区二价疫苗治疗小鼠幽门螺杆菌感染　　　白杨，陈丽，王继德，施理，唱韶红，张兆山，周殿元，张亚历【关键词】幽门螺杆菌ImmunzitiontreatmentofHelicobacterpyloriinfectionalmodelstudy　　【Abstract】AIM:ToinvestigatetheeffectsoftentofH.pyloriinfectioninanH.pyloriinfectedmousemodel.METHODS:C57BL/6miceinfectediceofeachgroupmunizedrespectivelybyca

2、talaseandadhesinconservation(separately,100μg)plusCT(2μg),catalase(100μg)plusCT(2μg),adhesinconservation(100μg)plusCT(2μg),catalase(100μg),adhesinconservation(100μg)andCT(2μg),PBSorallyonceaent,allanimalsachbiopsiesiquantitativebacterialcultureassay.RESULTS:Theeradicationrateoftmunothera

3、peuticeffectsthanthesinglevalencevaccine.MoreH.pylorivaccineresearchshouldbedirectedtothemultivalencevaccine.　　【KeyL/LO2,100mL/LCO2,850mL/LN2）中培养72h，湿度保持95％以上.H.pylori的菌落呈园形，凸起、光滑、灰白色、半透明，直径0.2~0.8mm左右.液体培养：取固体培养基上生长的H.pylori菌落至布氏肉汤中，抽滤瓶抽气换气2次以满足微需氧条件，恒温振荡培养120r/min培养48~72h.H.pylori的鉴定包括

4、菌落形态、涂片观察（包括革兰染色观察细菌形态、暗视野观察细菌活力）、尿素酶实验（将自制尿素酶试剂加入含鼠胃组织的96孔板各孔中，37℃作用5min，当有H.pylori感染时试剂由黄色变为红色）.灌胃用H.pylori的要求：革兰染色阴性，形态呈S形、螺旋形、杆状，暗视野下有活力，不含杂菌，密度约为1×1012/L.　　H.pylori感染小鼠模型的建立:采用文献〔4〕方法驯化H.pyloriss1株，分离可在小鼠胃内稳定定植的H.pyloriss1株，固体培养2~3d，菌落经鉴定后用布氏肉汤洗下，调整细菌浓度至1×1012CFU/L，每只小鼠灌胃0.5mL（约1×10

5、12/L）.所有动物灌胃前禁食12h，禁水4h.灌胃后禁食2h.连续5次，1wk完成.采用胃管法以确保H.pylori灌入胃内.末次灌胃后4wk随机处死5只小鼠，剖腹取胃，沿纵轴将胃切为3部分，一份行快速尿素酶试验，一份置40g/L甲醛固定供组织学检查，一份细菌培养，检查是否感染H.pylori.　　1.2方法　　将已鉴定感染H.pylori的小鼠随机分成7组：①二价疫苗组：经口喂饲过氧化氢酶和黏附素保守区各100μｇ加ＣＴ2μｇ；②单价过氧化氢酶疫苗组：经口喂饲过氧化氢酶100μg加ＣＴ2μｇ；③单价黏附素保守区疫苗组：经口喂饲黏附素保守区100μg加ＣＴ2μg；④单

6、纯过氧化氢酶组：经口喂饲过氧化氢酶100μｇ；⑤单纯黏附素保守区组：经口喂饲黏附素保守区100μｇ/次；⑥单纯CT组：经口喂饲ＣＴ2μｇ；⑦PBS组：经口喂饲PBS200μL/次.前3组为治疗组，每组28只小鼠；后4组为对照组，每组10只小鼠.免疫治疗前小鼠禁食12h，禁水4h.每只小鼠先用30g/L碳酸氢钠100μL灌胃以中和胃酸，10min后分别按上述分组灌胃，30min后再给小鼠提供水和食物.隔周免疫，加强免疫3次，剂量同前.末次免疫后4in以上.在超净工作台内迅速取出胃用于免疫治疗后幽门螺杆菌根除的鉴定，方法采用半定量细菌培养法〔5〕，胃组织称质量后，制成匀浆，

7、用布氏肉汤倍比稀释后，取200μL涂于Hp固体培养基，菌落计数后，计算单位胃组织的定植细菌密度.　　统计学处理：采用SPSS10.0软件，计数资料行χ2检验，计量资料的比较采用方差分析，P0.05为有显著性差异.　　2结果　　经尿素酶实验、组织病理学检查（Fig1）及细菌培养证实5只随机处死的小鼠全部感染H.pylori.细菌培养发现胃组织H.pylori的定植密度为1×105~1×106/g.　　胃组织培养H.pylori为阴性者定为根除，疫苗治疗组根除率显著高于其他4组（P0.05，Tab1）.未根除H.pylori的小鼠，我们进行了