桔梗总皂苷含量测定方法研究

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1、桔梗总皂苷含量测定方法研究李妍　张崇禧　魏建和　许旭东　褚庆龙【摘要】目的建立一种香草醛-硫酸比色法测定桔梗中总皂苷含量的方法，为桔梗的质量控制提供科学依据。方法索氏提取器提取，大孔吸附树脂纯化，香草醛-硫酸比色法测定桔梗总皂苷含量。结果比色法测定的线性方程为A=0.0034C+0.0064，相关系数为r=0.9997，平均加样回收率为96.97%，RSD=1.51%(n=6)。对不同来源桔梗中总皂苷含量进行测定，其含量范围为1.07%～3.76%。结论该法测定准确，重复性好，可用于桔梗药材中桔梗总皂苷的含量测定，便于对桔梗药材进行质量评价。【关键词】桔梗；总皂苷；桔

2、梗皂苷D；比色法　　Abstract：ObjectiveTodevelopavanillin-H2SO4colorimetrymethodforthedeterminationoftotalsaponinsinRadixPlatycodonissamples,inordertoprovideascientificbasisforthequalitycontrolofRadixPlatycodonis.Methods3为2代粉花自交株系，种质来源于河北；GP2BC4-10和GP2BC4-5为3代不育株系，GS902-7-2为3代自交保持株系，种质来源于安徽；GS218-

3、1，GS218-2和GS228-1为2代自交系，种质来源于山东；GS111-2为2代自交株系，GS262-g，加70%甲醇适量溶解，置1ml量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.2供试品溶液的制备取桔梗药材已干燥粉末约1.0g，准确称定，置索氏提取器中，加入10倍量的70%甲醇后，准确称重。浸泡30min，加热回流提取3次，2h/次，再次称重，补加70%甲醇至回流前重量。过滤，合并滤液于蒸发皿中，水浴蒸发至干，用10ml水溶解残留物，将所得溶液缓缓通过已处理好的AB—8型大孔吸附树脂柱(重量比1∶20)，反复上样5次后，以水150ml洗脱，弃去水液，之后

4、再以300ml60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，蒸干。残留物用70%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，定容，摇匀，即得〔10〕。　　2.3测定波长的选择精密移取80μl的标准品及50μl的供试品溶液，置10ml具塞磨口试管中，于70℃水浴蒸发至干，精密加入10%香草醛试液0.5ml，60%硫酸5ml，摇匀，于60℃水浴加热15min，冰水浴中冷却3min，随行试剂做空白，在紫外分光光度计于400～700nm波长范围全程扫描〔11〕，标准品及供试品的最大吸收波长均在472nm，且空白对照无干扰，故选择472nm为测定波长。　　2.4标准曲线的绘制精密吸取桔梗皂苷D标准

5、品溶液0，40，80，160，200μl,置10ml具塞磨口试管中，于70℃水浴蒸发至干，精密加入10%香草醛试液0.5ml，60%硫酸5ml，摇匀，于60℃水浴加热15min，冰水浴中冷却3min，以同法平行处理的空白溶剂为空白，在472nm处测定吸光度。以标准品浓度C(μl/ml)为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程为:A=0.0034C+0.0064，r=0.9997，结果看出C在此浓度系列范围内与A呈现良好的线性关系。　　2.5精密度实验精密吸取标准品溶液80μl，按照“2.4”项下方法显色测定吸光度，连续测定5次，结果RSD为0.30%，说明

6、仪器的测试性能良好。　　2.6稳定性实验精密吸取供试品溶液50μl，按照“2.4”项下方法操作，按不同时间测定其吸光度变化，在放置5，10，20，30，40，50，60min后，吸光度分别为0.214，0.214，0.214，0.215，0.216，0.215，0.217。结果表明该法在60min内，吸光度值稳定。　　2.7重复性实验称取桔梗药材已干燥粉末6份，每份1.0g，准确称定，按照“2.2”项下操作，制备6份供试品溶液，各准确移取50μl，按照“2.4”项下方法操作，测定吸光度A，计算总皂苷含量。结果平均含量为3.07%,RSD为1.17%。　　2.8加样回收

7、率实验准确称取已知含量的桔梗药材已干燥粉末6份，每份0.05g，加入桔梗皂苷D适量，按照“2.2”项下方法制备样品溶液，各取50μl样品液，按照“2.4”项下方法显色后测定吸光度，计算回收率。结果见表1。平均加样回收率为96.97%,RSD为1.51%(n=6)。表1加样回收率实验结果（略）　　2.9不同桔梗样品中总皂苷含量测定精确称取所采集的14种不同桔梗选育品系〔12〕，各3份，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，各精密移取50μl，按照“2.4”项下方法显色后测定吸光度，从回归方程中计算供试品桔梗总皂苷的含量，其测定结果见表2。表2桔梗总皂苷