sfrp过表达对结肠癌细胞株hct基因表达谱的影响

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1、SFRP4过表达对结肠癌细胞株HCT116基因表达谱的影响复旦大学附属肿瘤医院病理科黄丹研究背景研究背景CACancerJClin.2008;58:161-179结直肠癌的发病率研究背景Wnt信号通路分泌型卷曲相关蛋白SFRP一组分泌型糖蛋白家族SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达定位于染色体8p12～11.1包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。（除SFRP3以外）研究背景分泌型卷曲相关蛋白SFRP通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物

2、而阻碍Wnt信号研究背景研究目的检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。技术路线pcDNATM3.1-SFRP4重组质粒基因芯片检测（Pathway分析）双酶切鉴定WB鉴定SFRP4表达转染HCT116后筛选稳定表达株结果pcDNATM3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证部分基因芯片的结果pcDNA3.1载体大小为5500bp，SFRP4基因片段大小为1056bpEcoRI和HindIII双酶切重组质

3、粒后凝胶电泳图WesternBlot检测pcDNATM3.1-SFRP4质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达0道为pcDNA3.1空载体，1和2道为pcDNA3.1-SFRP4pcDNATM3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验证部分基因芯片的结果GenBankIDGenenameCommentsInduction-foldNM_001040056MAPK3丝裂素活化蛋白激酶34.3NM_001006617MAPKAP1丝裂素活化蛋白激酶相关蛋白15.0NM_00

4、2756MAP2K3MAPKK32.3NM_007181MAP4K1MAPKKKK12.8NM_021970MAP2K1IP1MAPKK1相关蛋白12.3NM_021284MEK蛋氨酸脑啡肽3.0上调的MAPK家族基因下调的TNF家族基因GenBankIDGenenameCommentsInduction-foldNM_006291TNFAIP2肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白20.25NM_006290TNFAIP3肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白30.38NM_014350TNFAIP8肿瘤坏死因子，al

5、pha-诱导蛋白80.25NM_003844TNFRSF10A肿瘤坏死因子受体超家族10A0.44NM_003840TNFRSF10D肿瘤坏死因子受体超家族10D0.5凋亡相关基因的改变GenBankIDGenenameCommentsInduction-foldNM_000875IGF1R胰岛素样生长因子受体4.9NM_000043FASTNF受体超家族成员62.6NM_006538BCL2L11Bcl2-L110.13pcDNATM3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定芯片生物信息学分析RT-PCR验

6、证部分基因芯片的结果1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。β-actin作为对照。RT-PCR验证基因芯片结果讨论我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p38MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤细胞的作用机制。讨论MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿

7、瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用结直肠癌细胞表达SFRP4后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。谢谢！