提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨论文

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1、提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨论文.freelentsaundersterileoperation，theplateletsamplesofte，acanprovidemoreoxygentopensateoxygensupplydeficiencyforplateletmetabolismandimprovetheefficiencyofplateletoxygenicmetabolismandthequalityofplateletduringpreservation.KeyexKx-21血细胞分析仪及配套稀释液（日本产品），He

2、raeusprimoR低温台式离心机(德国产品)，LG-PABER-Ⅱ血小板聚集仪。FACSCalibur流式细胞仪(美国BectonDickinson公司产品)。血气分析仪（AVLLISTGmbHMedizintechnikKleiststraBe48，8020Graz，奥地利）。氧苏TM医用自动充氧器(含99.9%的医用活性氧，经Co60灭菌，吉药管械(准)字2000第2560068号)。机采血小板由江苏省血液中心成分室提供。血小板按CS-3000plus血细胞分离机操作规程采集，ACD-A:全血=1∶10抗凝，血小板采集量约为2.5×1011/

3、袋。血小板处理保存血小板产品充分摇匀后，取30ml血小板制品，分装在2个保存袋中，1袋为对照组（Cc组），1袋为实验组（Tc组），放置无菌室，用氧苏TM医用自动充氧器在无菌条件下将充氧器钢针插入保存袋的联接管中，按指示标向轻轻拧动充氧器阀体，调整适当气量后进行充氧10分钟，在提高机采血小板血浆内溶解氧含量后，用热合机热合联接管并分别放置于(22±2)℃水平振荡的血小板振荡仪保存。血氧溶解度测定于充氧前、后即刻从机采血小板血浆保存袋内各取0.5ml样品，放入血气分析仪芯片中进行血气溶解度测定，作复管，取均值。血小板计数于保存前(0天)和保存后1、2、3

4、、4和5天，分别从振荡的血小板保存袋内各取1ml样品，摇匀后，抽取100μl，用稀释液作5倍稀释，用SysmexKx-21血细胞分析仪计数，作复管，取均值。血小板聚集功能的测定分别从保存0、1、2、3、4、5天的样本中取样，将已加入250μl的PPP血浆的测试杯放入血小板聚集仪(LG—PABER—Ⅱ型)中，测定PPP血浆的OD值，将样品PRP血浆加入测试杯中，加入测试球，预温2分钟后，用加样器吸取没食子酸丙酯溶液CPG(美国ACS公司)加入测试杯中，使终浓度为300μmol/L，开始检测，最大测定时定为360秒，测定最大血小板聚集率。血小板液乳酸含量

5、测定以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢产生丙酮酸，使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530nm时与乳酸含量呈线性关系。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，操作按说明书进行。分别对保存0、1、2、3、4、5天的样本测定。血小板CD62p表达量测定分别对保存0、1、2、3、4、5天的血小板取样稀释，处理后取100μl样品于测试管中，设置对照，在FACSCalibur流式细胞仪进行CD62p表达量检测。统计学处理各测定值组间均数比较用t检验。结果表1的数据显示了实验组和对照组在0天的机采血小板血浆中的含氧

6、量（溶解氧）。由表1可见，实验组含氧量显著高于对照组(P0.01)。表2的数据显示了实验组和对照组的血小板计数、血小板聚集反应功能、血小板液乳酸含量、血小板CD62p表达量在1-5天保存期内的变化。由表2可见，随着浓缩血小板保存时间的延长，两组血小板计数均呈下降趋势，两组之间的血小板计数比较无显著性差异(P0.05)。血小板液乳酸含量均不断上升，两组之间比较，保存1-3天的乳酸含量实验组明显低于对照组(P0.05)，而4-5天段无显著性差异(P0.05)。血小板聚集反应功能均呈下降趋势，两组之间比较，在2-3天差异有显著性(P0.05)。血小板CD6

7、2p表达量变化随保存时间呈上升趋势，实验组在保存1-3天时段明显低于对照组（P0.05）。Table1.Contentsofdissolvedoxygenintheplateletconcentratesoftller等［6］的研究发现，在血小板被活化时CD62p是释放最多的糖蛋白。当血小板破坏后，其胞浆内CD62p糖蛋白进入血浆，CD62p含量与血小板破坏程度呈正相关。在保存浓缩血小板时，存在多种激活或破坏因素：首先是血小板浓度的升高，导致血小板相互间的接触增多［7］，其次由于血小板的代谢活性较高，保存袋的透气性差，耗氧增加时供氧不足，使大量乳酸堆

8、积，酸度升高［8］。我们在试验中也证明，血小板CD62p表达量两组都随保存时间延长而不断上升，实验组的表达量