桑黄提取精制工艺的研究

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1、桑黄提取精制工艺的研究戈延茹，张春燕，姜树红【摘要】　　目的优选桑黄多糖的提取、精制工艺。方法采用正交实验设计优选桑黄多糖提取工艺。通过吸附法与醇沉法的比较，选出最佳精制工艺。结果桑黄多糖最佳提取工艺为：粉碎粒度60目，浸泡12h，用14倍的水，提取3h，用壳聚糖吸附法精制多糖。结论浸泡时间对实验影响较大，采用壳聚糖吸附法精制，多糖损失少，此提取精制工艺方法可行。【关键词】桑黄；多糖；正交设计；提取；精制　　Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractionandpurificationmethodofthepolysaccharideofPhellin

2、usigniarius.MethodsThebsetextractmethodofthepolysaccharideinedbyorthogonaldesign.Throughtheparisonoftheethanolextractionandadsorbingpurification,thebestpurificationmethodethodofthepolysaccharideinthePhellinusigniariusesh,theimmersiontimeaterial14:1,andextracted3times.Chitosanabsorbingpurificatio

3、nmersiontimegreatlyinfluencedtheextractionofPhellinusigniarius.Chitosanabsorbingpurificationg，置250ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.4μg/ml标准葡萄糖溶液备用。　　5%苯酚试剂的配制：称取蒸馏后苯酚7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。　　标准曲线的绘制：精确量取葡萄糖标准溶液0.1,0.2,0.3,0.5,0.7,0.9ml置干燥试管中分别再加水使其成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液2.0ml，摇匀。然后加浓H2SO47.0ml，充分摇匀，室温放置25

4、min，在490nm处测定其最大吸光度，同时做一空白。以吸光度对葡萄糖浓度线性回归，得回归方程为Y＝0.0634X+0.0104(r＝0.9922，n＝6)。实验表明，葡萄糖在0.91～9.16μg/ml范围内呈现良好的线性关系。见图1。　　图1标准曲线（略）　　2.1.2样品测定样品经处理后(供试品溶液的制备)，移至250ml容量瓶中，定容，摇匀，精确吸取2ml到25ml容量瓶，定容，摇匀成为样品液。测定时，精确吸取样品液1ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量：　　　　多糖含量（%）=CD/l)；D为样品溶液的稀释倍数，W为生药的重量(μg)。　　2.2桑黄多

5、糖提取工艺的选择　　2.2.1制定考察因素与水平〔5〕据文献调研及实验经验，采用水提取，提取温度为100℃，其中粉碎粒度(A)，浸泡时间(B)，提取时间(C)，水料比（D）对实验结果有影响，本实验采用正交设计法选定4者为因素，各取3水平，如表1所示，以桑黄多糖含量为考察指标进行实验。　　表1影响因素及水平L9（34）（略）　　2.2.2正交结果分析见表2～3。　　表2结果与分析（略）　　表3显著性分析（略）　　　由表2，表3可以看出，桑黄多糖提取最佳工艺为A3B2C3D3，即：粉碎粒度为60目，浸泡12h，提取时间为3h，水料比1：14。显著性B>C>D>A，F0.1

6、0水平上B因素对实验结果有显著影响。　　2.3桑黄多糖精制工艺的选择〔6，7〕　　2.3.1药材的提取取桑黄药材100g,按最佳提取方案提取，提取液过滤，合并滤液，浓缩至400ml，定容到500ml容量瓶中备用。　　2.3.2水提液的制备取3份药材提取液，每份1ml，置250ml容量瓶中，定容即得水提液供试品。用“2.1.2”项条件测定多糖的含量，重复做3次。结果见表4所示。　　表4最优方案所得多糖含量（略）　　2.3.3醇沉法精制取3份药材提取液，每份10ml，分别加入95%乙醇，使乙醇浓度达到70%，冰箱内静置24h，然后过滤，滤液再加入95%乙醇，使乙醇浓度达到90%，冰箱内静置

7、24h，过滤，滤渣水溶解，定容至50ml容量瓶中，精密吸取2ml置50ml容量瓶中，定容至刻度，即得醇沉法供试液。用“2.1.2”项条件测定多糖的含量，重复做3次。　　2.3.4壳聚糖吸附法精制壳聚糖吸附剂的配制：将壳聚糖用1%醋酸配成1%溶液。壳聚糖吸附剂的用量确定：取20份桑黄水提液，每份5ml，分别加入壳聚糖吸附剂5，10，15，20，25，30，……100d，结果加入壳聚糖吸附剂25d时澄明度最好。壳聚糖吸附法精制工艺：取3份桑黄，每份