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时间:2018-11-29
《PCSK9siRNA抑制oxLDL诱导的THP1源性巨噬细胞炎症因子表达与分泌》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、-南华大学学位论文原创性声明本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名:年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读(博/硕)士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有,本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用
2、学位论文的规定,即:学校有权保留学位论文,允许学位论文被查阅和借阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容,可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文;学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》,并按《中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文,解密后适用该授权。作者签名:导师签名:年月日年月日---目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要……………………
3、………………………………………..3正文………………………………………………………………………6前言……………………………………………………………………6实验材料…………………………………………………………….9实验方法……………………………………………………..…….11实验结果……………………………………………………………16讨论…………………………………………………………………29结论…………………………………………………………………32参考文献………………………………………………………….....33主要英文缩略语索引…………………………………………………38综述…………………
4、………………………………………………….39硕士期间发表论文………………………………………………….50致谢…………………………………………………………………….51---基金资助本论文研究工作受到下列研究基金的资助:国家自然科学基金(30700325)湖南省应用基础研究计划重点项目(2008FJ2006)湖南省科技厅项目(2010TP4008-2)湖南省教育厅重点科研项目(10A105)湖南省高校科技创新团队支持计划---PCSK9siRNA抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症因子表达与分泌中文摘要研究背景近年来,大量的研究表明动脉粥样硬化是一种慢性炎症性病理过程。动脉粥
5、样硬化病变中不仅含有大量的脂质,而且有大量的炎症细胞浸润,并以单核/巨噬细胞和淋巴细胞的集聚为特征。动脉粥样硬化发生、发展中,这些炎症细胞可分泌大量的炎症因子,参与调节细胞的增殖或凋亡、细胞外基质的合成或降解以及血管的重塑等过程。PCSK9是2003年应用生物信息学方法和DNA微阵列技术发现的一个与血液胆固醇代谢调节相关的基因,最近的研究表明,PCSK9作为一种分泌性蛋白,除了降解LDLR,调节胆固醇代谢之外,可能还具有其他的一些生物学功能。我们前期研究发现PCSK9在兔动脉粥样硬化斑块以及THP-1源性巨噬细胞中高表达,LDL和ox-LDL都可以上调PCSK9在THP-1源性巨噬细胞
6、中的表达。靶向PCSK9的RNA干扰能有效抑制ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞的凋亡作用,这提示ox-LDL在巨噬细胞中的生物学效应可以被PCSK9所影响。ox-LDL诱导巨噬细胞中炎症因子的表达与分泌是ox-LDL的重要生物学效应之一,研究PCSK9是否也能干预炎症因子的表达与分泌具有重要的科学意义。目的观察PCSK9siRNA对ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞分泌炎症因子的影响,为阐明PCSK9在动脉粥样硬化中的作用提供实验依据。材料与方法用不同浓度的ox-LDL(0,10,20,40,80μg/ml)处理经PMA诱导贴壁的THP-1源性巨噬细胞不同时间(0h,6h,
7、12h,24h,48h),RT-PCR、ELISA、WesternBlot分别1---检测炎症因子IL-1α、IL-6、TNF–α以及PCSK9mRNA和蛋白的表达。应用Lipofectamine2000转染不同浓度的PCSK9siRNA(20nmol/l,40nmol/l,80nmol/l)进入THP-1源性巨噬细胞24h,筛选出最有效的siRNA浓度,将此浓度siRNA转染THP-1源性巨噬细胞24h后,再加入ox-LDL处理24h,RT-
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