《月季的花药培养》ppt课件

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1、月季的花药培养花的结构：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊药隔：花药中部，由薄壁细胞构成，内有维管束花粉囊（4或2）囊壁花粉粒表皮纤维层2、花药的结构雄蕊：花丝花药：囊状结构内有很多花粉粒花粉是花粉母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞被子植物的花粉发育②花粉粒的形成花粉母细胞（小孢子母细胞）减数分裂①经历时期：四分体时期、单核期、双核期四分体时期（进入单核期）有丝分裂单核靠边期(小孢子)单核居中期(小孢子)小孢子（单核花粉粒）精子精子有丝分裂花粉管细胞核生殖细胞核生殖细胞营养细胞双核期两个精子和一个营养核的基因型相同③花粉粒类型一个成熟的花粉粒即

2、为雄配子体，有两种情况：二核花粉粒:成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒:有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。两个精子和一个营养核的基因型相同。花粉胚状体愈伤组织从芽生根移栽脱分化分化再分化诱导产生花粉植株的两条途径花粉从芽人工种子又称人造种子、合成种子或无性种子，就是将组织培养所产生的体细胞胚、不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁殖体，包裹在能提供营养的胶囊（人造胚乳）里，再在外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜（人造种皮），造成一

3、种类似种子的结构，能在一定的条件下萌发生长，形成完整植株。不同植物同一植物的不同生理状况（花期早期－初花期）合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间）此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等（三）影响花药培养的因素1.材料的选择为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？答：花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。2.培养基的组成月季花药培养基配方在1000mLMS培养基配方中添加2.4—D0.4mgKT0.2mgIAA4mg调节PH至5.8。实验操作结果分析与评价（一）材料的选取染色镜检（二）材料的消毒酒精、氯化汞、次氯酸钙（三

4、）接种和培养MS培养基配方中添加GA、IBA和BA，质量浓度分别为0.1mg/L、0.5mg/L和1mg/L。诱导丛芽或胚状体的培养基配方MS培养基各成分用量减半，添加IAA，质量浓度为1mg/L。诱导生根的培养基配方（一）材料的选取选择花药时，一般通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。最常用的方法有醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。①醋酸洋红法染色机理醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色。将体积分数45％的醋酸100ml煮沸

5、，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。②醋酸洋红的配置2、醋酸洋红法将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。③染色操作3、焙花青—铬钒法将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀①卡诺氏固定液的配制方法花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。②

6、焙花青—铬钒溶液的配制方法③染色操作（二）材料的消毒1.花蕾用V/V为70%的酒精浸泡30秒2.无菌水清洗3.无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4.放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）5.无菌水冲洗3~5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。（三）接种和培养灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，

7、因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。通常每瓶接种花药7-10个，温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。（主要原因是营养核和生殖核融合造成的。）①培养条件：温度控制在25℃左右，不需