培养基的配制和灭菌

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1、微生物学实验实验四培养基的配制及灭菌刘森林执教单位生命科学学院学习培养基配制的原理和基本步骤学习高压蒸汽灭菌的原理和方法实验目的实验原理一、常用器皿的洗涤与包扎：试管（塞）：10支三角瓶250mL（棉塞）：1个1ml吸管6支,10ml吸管1支培养皿10个（一包）制作涂布器2个：用酒精灯将以上用品包扎后，灭菌。三.实验步骤—培养基的配制二．牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面1支/人、培养皿1个/人、三角瓶固体200mL/3组）配方：营养肉汤1.8g琼脂2g固体培养基2%(1.5-2.5%)蒸馏水100mL三.实验步骤—培养

2、基的配制1.斜面的制备准确地称取营养肉汤1.8*2g放入烧杯中。在上述烧杯中先加入200ml水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，每支试管约4ml。（注意：每人1支试管，3个组一起做）。加塞，包扎后，灭菌。注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。三.实验步骤—培养基的配制2.固体培养基的制备

3、准确地称取营养肉汤1.8*2g放入三角瓶中。加入200ml水，然后，将称好的琼脂4g加入，用玻棒搅拌均匀。加塞，包扎后，灭菌。每3组1瓶。注意：在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%~2.0%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。三.实验步骤—培养基的配制说明：加塞：培养基分装完毕后，在试管口和三角瓶口上塞上棉花塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。包扎：加塞后，将全部试管

4、用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。标记：用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三.实验步骤—培养基的配制4．灭菌将上述培养基以0.103Mpa,121℃,20min高压蒸气灭菌.5.搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。6.到固体平板将灭菌培养

5、基降温50℃，到固体平板。三.实验步骤—培养基的配制高压蒸汽灭菌操作步骤：121℃,20min（15-30min）1.首先将内层锅取出，再向外层锅内加适量的水，使水面与三角架相平为宜。注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅干而引起爆炸事故2.放回内层锅，并装入灭菌物品。注意：不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞三.实验步骤—高压蒸汽灭菌3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓

6、松紧一致，勿使漏气。4.加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MP，121.5℃，20分钟灭菌。注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力。故锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。三.实验步骤—高压蒸汽灭菌5.灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。注意：压力必须降至“0”

7、时才能打开排气阀，开盖取物。否则，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。三.实验步骤—高压蒸汽灭菌ThankYou!ThankYou!