【实验】培养基的配制和灭菌.pptx

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1、课题微生物对培养基的选择作用一、培养基作用、种类二、无菌技术三、制备牛肉膏蛋白胨培养基主要内容微生物包括哪五类：病毒细菌放线菌真菌原生动物特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基础知识课题1微生物的纯培养微生物的实验室培养条件：（1）为培养的微生物提供合适的营养和环境条件（2）确保其他微生物无法混入研究和应用微生物的前提防止杂菌入侵，获得纯净的培养物一、培养基人们按照微生物对营养物质的不同需求，配置出供其生长

2、繁殖的营养基质称培养基液体培养基：用于工业生产固体培养基：（一般用试管或培养皿盛装，在液体培养基的基础上再添加凝固剂琼脂。）用于菌种分离、鉴定菌落培养基的种类1、按物理状态分：2、按功能分：选择培养基：加入某种化学物质，从众多微生物中分离出所需微生物鉴别培养基：加入某种试剂，鉴别不同种类的微生物加入青霉素的培养基:不加氮源的无氮培养基:不加含碳有机物的无碳培养基:几种选择培养基举例：分离酵母菌、霉菌等真菌分离固氮菌分离自养型微生物加入唯一碳源为纤维素的培养基分解纤维素的细菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌一般的培养基均需要碳源、氮源、水和无

3、机盐等（含C、N的有机物既是异养型微生物的碳源也是氮源）培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g琼脂20.0g分析营养构成？各成分主要提供何种营养成分培养基的配制原则①目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。②营养要协调：培养基中各种营养物

4、质的浓度和比例要适宜。③pH要适宜：细菌培养基pH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：（根据微生物生长时对营养物质的需求）物质牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.称量准确称取各种成分，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。三、实验操作思考：该培养基从物理性质分属于哪种？原因？含有几种营养成分？牛肉膏提供上述哪几种成分？二、无菌技术无菌技术泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法技术。获得纯净培养物的关键是防止外来

5、杂菌的入侵，无菌技术就是防止杂菌污染的操作技术。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。P15-16旁栏思考比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能消毒与灭菌的比较消毒1、无菌技术的种类灭菌使用较为温和的

6、物理和化学方法（酒精、紫外线）来杀死部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；接种的过程要在酒精灯火焰附近进行。避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品接触使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min9(牛奶）3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源（酒精擦拭双手4、紫外线消毒（工作台、接种室）(能使蛋白质变性，还

7、能损伤DNA的结构）……(1)消毒的方法3.常用的消毒与灭菌的方法（1）、灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。试管口或瓶口等容易被污染的部位3、常用的消毒与灭菌的方法（2）、干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160～170OC中加热1～2h即可。（3）、高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压蒸汽灭菌锅内煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持15～30min即可。