实验二抗体制备和凝集反应沉淀反应

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1、实验二抗体制备和凝集反应(2)&沉淀反应实验二抗体制备和凝集反应(2)&沉淀反应1.原理:试管凝集抗原抗体反应直接凝集反应玻片凝集定性半定量1)玻片凝集反应:已知抗原+未知抗体凝集团块混浊?2)试管凝集反应：定量抗原+系列稀释抗体不同程度的凝集反应YESNO确定抗体的滴度抗体滴度：能产生明显凝集反应的、抗体最高稀释度的倒数。实验材料：灭活的伤寒菌液(7×108/ml),待测血清2.方法：0.50.50.50.50.50.50.50.50.51:201:401:801:1601:3200.5弃掉123450.160.9生理盐水(ml)待测血清对照管0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.

2、5ml①②③④灭活的伤寒菌液0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml抗体稀释度彻底混匀56℃,1h3.注意事项标记试管正确使用滴管彻底混匀温度:56℃记录时间轻拿试管，观察结果，首先观察对照管4.预期结果+很小的凝集颗粒混浊-无凝集现象与对照相同++小、部分凝集块中等混浊+++大多凝集管底轻度混浊++++大的凝集块清亮凝集程度沉淀上清管底沉淀凝集程度最高稀释比例待测血清的滴度Test2沉淀反应——琼脂扩散实验经典抗原抗体反应的一种。分类:琼脂扩散环状沉淀反应絮状沉淀反应免疫电泳沉淀反应:沉淀线或沉淀环可溶性抗原相应抗体+琼脂扩散实验:可溶性抗原和抗体在琼脂中扩散，相遇，

3、在适当比例下形成沉淀线或沉淀环。分类:单向琼脂扩散实验:仅抗原或抗体扩散——定量实验双向琼脂扩散实验:抗原和抗体同时扩散——定性实验Ⅰ单向琼脂扩散实验:抗原浓度沉淀环直径平方AgAgAgAg琼脂中含抗体1:101:201:401:80Ag未知Ⅱ双向琼脂扩散实验:方法：1.微波炉中彻底融化1%琼脂2.取5ml琼脂均匀铺在载玻片上凝固3.在琼脂板上打5个孔4.在孔中加入相应样品AbAg1Ag1Ag2Ag25.37℃,孵育24h注意：琼脂板一定平整、光滑(无气泡).琼脂不可过厚孔中液体不可过满Test3再次免疫2.方法:脱纤维绵羊红细胞（SRBC）加入3ml生理盐水，混匀2000rpm,离心，5

4、min弃上清制备绵羊红细胞溶液20%、25%、30%、40%取0.1ml皮下注射免疫小鼠加入3ml生理盐水，混匀2000rpm,离心，5min弃上清