三叶青的毒理学研究

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1、三叶青的毒理学研究关键字：毒理学三叶青为葡萄科植物三叶崖爬滕Tetrastigmahems-leyanumDielsetGilg的根［1］，又名金线吊葫芦、石老鼠在浙江民间素有食用习俗，为评价其安全性。我们按《保健食品检验与评价技术规范》（2017年版）中“食品安全性毒理学评价试验”进行实验［2］，现将结果报告如下。1样品三叶青块根，切片，10倍水浸泡2h，每次lh，收集煎液。浓缩成lg生药/ml浓度，由杭州天惠医药科技有限公司提供。按民间食用习惯15g/人/d计算。2实验动物和检测条件实验用ICR小鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级医学实验动物合格证号

2、为2001001，医学实验动物设施合格证号为2001001。实验用SD大鼠由浙江省实验动物中心提供，清洁级：医学实验动物合格证号为2001001,医学实验动物设施合格证号为2001001。实验动物饲料由浙江省实验动物中心提供，执行标准GB14925-2001。检测环境条件:温度范围20°C〜25°C，相对湿度范围60%〜70%。实验动物试验前在动物房环境中适应3天，染毒前禁食过夜，不限制饮水。3实验方法大鼠急性经口毒性试验实验动物选用健康、成熟、体重180〜220gSD大鼠20只，雌雄各半。剂量和给药方法按最大耐受量试验方法将大鼠分为/kg，体重剂量组，

3、每组20只，雌雄各半。大鼠灌胃前停食16h。连续观察14天，并记录动物中毒症状及死亡情况。观察指标染毒后，观察大鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限2周。小鼠急性经口毒性试验实验动物选用健康、成熟、休重18〜22gICR小鼠20只，雌雄各半。剂量和给药方法按最大耐受量试验方法将小鼠分为/kg体重剂量组，每组20只，雌雄各半。小鼠灌胃前停食16h。连续观察14天，并记录动物中毒症状及死亡情况。观察指标染毒后，观察小鼠的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。试验试验菌株选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏四株，即TA97a、TA98、TA100、TA

4、102。由上海劳动卫生职业病研究所提供，经生物学鉴定合格后进行试验。剂量选择及阳性对照物试验采用平板摻入法。样品以蒸馏水稀释至相应剂量。用TA100菌株的非代谢活化系统进行预试验，结果在剂量为5000yg/皿时未出现明显的增菌和抑菌现象，故正式试验时选择试验浓度为8、40、200、10⑻、5000yg/皿5个剂量组，外加阴性对照（蒸馏水，DMS0）和阳性对照组（9-氨基吖啶、2，7-二氨基芴、叠氮钠、2-乙酰氨基芴、丝裂霉素C、1，8-二羟基蒽醌），每种菌株每个测试浓度设三皿平行，在加和不加S9条件下进行试验。观察指标直接计数培养基上各菌株的回菌落数。小

5、鼠骨髓细胞微核试验实验动物实验用ICR小鼠由浙江省实验动物中心提供，体重25〜28g。剂量和给药方法小鼠随机分、、/kg体重三个剂量组，一个阴性对照组（灌胃等容量蒸馏水）和一个阳性对照组（丝裂霉素/kg体重），每组10只。样品以灌胃方式给予，连续5天，每天1次，对照组也相同处理。于首次灌胃后第35天脱臼处死，每组随机选5只小鼠分别取两侧附睾，制成吸滤液直接涂片，自然干燥，甲醇固定，用1%伊红染观察指标高倍镜下观察精子形态并计数，每只小鼠计数完整精子woo条，计算精子畸形发生率（％）。4实验结果大鼠急性经口毒性试验实验期间，各组大鼠均未见明显症状，也无死亡

6、。三叶青对雌雄大鼠经口LD50均大于lOOg/kg体重，属实际无毒。小鼠急性经口毒性试验实验期间，各组小鼠均未见明显症状，也无死亡。三叶青对雌雄大鼠经口LD50均大于/kg体重，属实际无毒。试验各菌株回变菌落数见表1。表1三叶青Ames平扳掺入试验结果（略）从实验结果可见，不同浓度受试物在加和不加S9条件下的回变菌落与阴性对照组相近似，而阳性对照回变菌落数均高于阴性对照回变菌落数2倍以上。说明三叶青Ames试验检测结果为阴性。小鼠骨髓细胞微核试验三叶青对小鼠骨髓细胞微核率的影响见表2。表2三叶青对小鼠骨髓细胞微核率的影响（照组比较）用卡方检验统计，雌雄各

7、剂量组与阴性对照组比较，微核千分率均无显著性差异，而阳性对照组微核率则显著高于阴性对照组，其差异有显著性（P髓嗜多染红细胞微核率未见明显影响。小鼠精子畸形试验三叶青对小鼠精子畸形发生率的影响见表3。表3三叶青对小鼠精子畸形发生率的影响（略）注:仲剂量组与阴性对照组比较，小鼠精子畸形发生率均无显著性差异，而阳性对照组则明显高于阴性对照组，其差说明三叶青对小鼠精子畸形发生率未见明显影响。5结论三叶青按《保健食品检验与评价技术规范》（2017年版）中“食品安全性毒理学评价试验:第一阶段大鼠经口急性毒性半数致死LD50）,雌雄两性别均大于100g/kg体重:小鼠

8、经口急性毒性半数致死量（LD50）,雌雄两性别均大于/kg体重，按急性毒性分级标