中药三叶青抗肿瘤作用机制的实验研究

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1、第二届长三角科技论坛营养专题论坛论文集中药三叶青抗肿瘤作用机制的实验研究丁钢强浙江省疾病预防控制中心肿瘤治疗一直是困扰医学界的世界性难题，中医中药为治疗肿瘤开辟了一条崭新的道路。三叶青为葡萄科崖爬藤属植物，学名为三叶崖爬藤TetrastigmahemsleyanumDielset．Gilg。异名为蛇附子(《植物名实图考》)，石抱子(《江西草药》)，金线吊葫芦、三叶对(《浙江民间常用草药》《浙江省中药炮制规范》1994年版)，小扁藤、三叶扁藤、拦山虎(《广西实用中草药新选》)，雷胆子(《湖南中草药新医疗法资料选编》)，主要分布于我国西南及安徽、浙江、江

2、西、福建、湖北、湖南、广东、广西、云南等省。三叶青以块根或全草入药，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，用于治疗高热惊撅、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬、痈疗疮疖等症，．具有很好的疗效。在民间三叶青还被用于肿瘤的治疗，被许多民间验方收载，并认为具有很好的治疗作用。《植物名实图考》载“蛇附子”云：“蛇附子产于建昌。蔓生，茎如初生小竹，有节。一枝三叶，叶长有尖，圆齿疏纹。对叶生须，须就地生，根大如麦冬。但医以治小儿高热、止腹痛，取浆冲服”。由于其为地方药材，到目前为止，对它进行的研究并不多，因该植物为中国特有物种，国外研究尚未开展。在已

3、见的报道中，三叶青主要用于高热、肝炎和肿瘤方面的治疗，多出现于民间经验方中。三叶青为多年生蔓生藤本，生于阴湿山坡、山沟、溪谷中，野生资源在浙江、江西、云南等地山区分布较广。若能开发，就可充分利用不能栽种经济作物的山沟、坡地加以人工种植，不但能保持水土，也将必然会带动这些地区的经济发展做出不可低估的作用。目前的研究还没有有关三叶青活性成分对抗肿瘤或其他功能作用的研究。而从我们目前的临床实践看，三叶青植物对肿瘤病人还是很有效果的，浙江省有些第二届长三角科技论坛营养专题论坛论文集地区也有食用习惯，因此，如果进一步加强其活性成分和功能作用的研究，对充分利用这

4、一植物资源具有十分重要意义。一、中药三叶青体内免疫调节作用的实验研究1．三叶青提取物对肝癌细胞HepG2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用研究为探讨三叶青提取物对肝癌细胞HepG2及原代大鼠肝细胞的体外毒作用，我们分别采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水四种物质萃取三叶青各个不同溶解极性成分，应用体外细胞培养技术，以细胞活性、细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力的改变为指标，观察三叶青提取物对肝癌细胞HepG2体外毒作用的时效、量效关系，并观察其对正常原代培养大鼠肝细胞的影响。三叶青提取物以1×10一气／L的浓度与HepG2共同培养，在24h较空白对照组的细胞活性有显

5、著降低；不同浓度的提取物和HepG2共同培养，乙酸乙酯提取部位对细胞活性及酶学的改变影响更有显著性；对原代培养大鼠肝细胞活性及LDH也有一定的影响，但较对HepG2影响小。提示三叶青提取物对HepG2细胞具有明显的体外细胞毒作用，其毒性作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关，但对正常原代大鼠细胞毒性较小。2．中药三叶青对小鼠体内细胞因子的影响中药三叶青经乙醇提取后，分别用醚、酯、醇、水四种物质萃取三叶青各个不同溶解极性成分，选择乙酸乙酯萃取物，作为本实验研究中三叶青有效成分。实验动物选择清洁级雌性ICR,'j、鼠(由浙江中医学院实验动物中心提供)。三

6、叶青乙酸乙酯提取物，用蒸馏水配制成各剂量。实验设四个剂量组和一个蒸馏水对照组。四个剂量分别相当于人推荐量的5、10、30和50倍。灌胃给药15天，灌胃容量按0．1ml／109体重计，每组5只小鼠。15天后处死眼眶取血，分离血清。用酶联免疫法(ELISA)检测小鼠体内细胞因子IL-2、IL-6、TNF—Ct、IFN—Y水平变化。结果表明，小鼠服用三叶青乙酸乙酯提取物后，体内IL一2、IL一6含量没有显著变化，各个不同服药剂量组间也无显著差异，而IFN-y、TNF—n含量存在增长现象，并且随着药物剂量增大，细胞因子增长量存在相应增高趋势。IFN-Y含量在

7、剂量30mg／kg组小鼠体内的增长最多，为386．38___42．71pg／ml，与对照组(313．62±36．37pg／m1)比存在显著第二届长三角科技论坛营养专题论坛论文集性差异，P

8、(sRBC)诱导小鼠DTH(足跖增厚法)、小鼠血清溶血素测定、抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)、小鼠