假单胞菌荧光铁载体pvd性质的体外研究

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1、假单胞菌荧光铁载体Pvd性质的体外研究【摘要】：Pvd(Pyoverdine)，又称焚光铁载体，承载着细菌中铁的运输功能，是许多细菌在缺铁条件下，合成并释放到环境中的一种对铁离子有很高亲和力的低分子量化合物，使得它们溶解环境中的铁离子并递送到细菌细胞中去满足细菌对铁的需求。假单胞菌的致病机制与铁的吸收、调控存关,而铁的吸收、调控过程又与荧光铁载体Pvd密切相关。假单胞菌的致病过程是很复杂的，虽然已取得了广泛的研究成果，但由Pvd参与的铁吸收、调控过程中很多细节仍有待于进一步研究。木文选用荧光假单胞菌荧光铁载体Pvd、稀土离子Tb3+和牛血清白蛋0BSA、

2、人血清白蛋白HSA、伴清蛋白apoOTf三种蛋白质为研究对象，从以下方面研宄了Pvd与Tb3+的相互作用、结合Tb3+前后Pvd和Pvd-Tb与三种蛋白质之间的相互作用。首先，用分子生物学技术对绿脓杆菌ATCC15692(PAO1)诱导、表达、纯化得到了Pvd。其次，荧光猝灭法和配体竞争法研究表明，Pvd可以与Tb3+以h1的化学计量比结合，且结合过程是可逆的。荧光热力学和荧光寿命研究表明，结合Tb3+后的Pvd(即Pvd-Tb)与BSA的结合能力要稍强于结合Tb3+前的Pvd，两者与BSA的结合比都为1:1;通过对结合Tb3+前后Pvd与BSA结合常数

3、的计算，证明结合Tb3+前后Pvd与BSA都以疏水作用假单胞菌荧光铁载体Pvd性质的体外研究【摘要】：Pvd(Pyoverdine)，又称焚光铁载体，承载着细菌中铁的运输功能，是许多细菌在缺铁条件下，合成并释放到环境中的一种对铁离子有很高亲和力的低分子量化合物，使得它们溶解环境中的铁离子并递送到细菌细胞中去满足细菌对铁的需求。假单胞菌的致病机制与铁的吸收、调控存关,而铁的吸收、调控过程又与荧光铁载体Pvd密切相关。假单胞菌的致病过程是很复杂的，虽然已取得了广泛的研究成果，但由Pvd参与的铁吸收、调控过程中很多细节仍有待于进一步研究。木文选用荧光假单胞菌荧

4、光铁载体Pvd、稀土离子Tb3+和牛血清白蛋0BSA、人血清白蛋白HSA、伴清蛋白apoOTf三种蛋白质为研究对象，从以下方面研宄了Pvd与Tb3+的相互作用、结合Tb3+前后Pvd和Pvd-Tb与三种蛋白质之间的相互作用。首先，用分子生物学技术对绿脓杆菌ATCC15692(PAO1)诱导、表达、纯化得到了Pvd。其次，荧光猝灭法和配体竞争法研究表明，Pvd可以与Tb3+以h1的化学计量比结合，且结合过程是可逆的。荧光热力学和荧光寿命研究表明，结合Tb3+后的Pvd(即Pvd-Tb)与BSA的结合能力要稍强于结合Tb3+前的Pvd，两者与BSA的结合比都

5、为1:1;通过对结合Tb3+前后Pvd与BSA结合常数的计算，证明结合Tb3+前后Pvd与BSA都以疏水作用力结合。计算得出Pvd和Pvd-Tb与BSA相互作用的一系列热力学常数，表明其与BSA之问的反应为放热反应，同时是一个自发性的反应。同样，错合Tb3+前后的Pvd与HSA的作用和与BSA的相似，且Pvd-Tb易发www.yffabiao.net论文发志专家与HSA的结合能力稍强于Pvd。不同的是Pvd与apoOTf有相互作用，但Pvd-Tb却完全不与apoOTf作用。Pvd及Pvd-Tb与三种蛋白结合能力顺序为：BSAHSAapoOTf，且结合Tb

6、3+前后Pvd与三种蛋白结合能力的顺序为Pvd-TbPvd。最后，动力学实验研宄表明Pvd能竞争出单铽(TbNOTf和OTfTbc)及双铽(TbNOTfTbc)伴清蛋白所结合的Tb3+，说明Pvd与Tb3+的结合能力远远大于apoOTf与Tb3+的结合能力【关键词】：荧光铁载体PvdBSAHSAapoOTf荧光动力学【学位授予单位:L山西大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2013【分类号】：Q93【目录】：中文摘要10-11ABSTRACT11-13第一章综述13-251.1引言131.2铁载体Siderophore的发展概况13-181.2.1铁

7、载体siderophore的分类14-151.2.2铁载体siderophore的结构151.2.3铁载体siderophore的功能和作用机理15-181.3细菌体内铁吸收、调控系统18-221.3.1铁载体Pvd的铁调控系统中涉及的各种蛋白18-211.3.2周质铁键合蛋白FBP或FbpA的铁调控系统211.3.3铁载体hemophore的铁调控系统21-221.4铁载体Pvd与某些蛋白质的相互作用22-231.4.1Pvd与特界性细胞外膜受体FpvA的相互作用221.4.2Pvd与内膜ABC转运体的相互作用22-231.4.3铁载体Pvd与蛋白质相

8、互作用的研宄方法231.5关于本课题23-25第二章荧光铁载体Pvd的表达及纯化