mapks信号通路在天然冰片调节血肿瘤屏障通透性中的作用

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1、MAPKs信号通路在天然冰片调节血肿瘤屏障通透性中的作用邢燕梅，闫晓宁，郭军洽，张荣’(广州中医药大学临床药理研究所，广州510405)脑胶质瘤作为祌经系统最常见的恶性肿瘤，占全部颅闪肿瘤的40%〜50%［1］,对家庭和社会的危害极大，己成为导致死L：的主要肿瘤之一。除了毛细胞型星形细胞痛及少数位于非功能区、体积较小的胶质痫叫以通过手术根治外，人部分的脑胶质瘤需要在术后辅以放化疗为主的综合性治疗。在脑胶质瘤中，由于血瘤屏障(blood-tumorbarrier，BTB)的存在，限制了抗肿瘤药物进入肿瘤组织，从而导致在肿瘤部位不能达到有效的治疗浓度，这也是n前化疗效果一直不甚理想

2、的主耍原因之一。已有众多文献报道，冰片在促进药物透过血脑屏障方面其有重要的应用价位。冰片常作为脑部病变的引经药，当w与M:他治疗颅脑疾病的药物共用应用时，能够增加药物的脑部靶句性，提高合用药物的脑组织分布，同时可以使药物更加易于透过血脑屏障，增加脑内的药物浓度，提高艽脑组织内生物利用度，从而增强药物的治疗效果。但冰八对血肿瘤屏障的影响，至今鲜行文献报道。课题组前期体内研究®示，天然冰片能选择性开放BTB，增强抗肿瘤药物顺铂、甲氨蝶呤的血肿瘤屏障通透率，提商其脑内生物利川度。体内外实验结果均显示，其选择性开放BTB的机制与可逆性下调紧密连接蛋白Z0-1、F-actin有太［2_3

3、］，但冰片如何调控TJ齿白的分子机制还需进一步阐释。国闪外多项研究显示，MAPKs信号转导通路的激活与脑胶质瘤的发病密切相关。ERK1/2在脑胶质瘤组织屮被广泛激活，并且主要聚集在肿瘤细胞核中14］，提示ERK1/2的激活及易位可能与脑胶质瘤的发生有关。另有临床研究发现，多形性恶性脑胶质瘤病例中，85%以上的病例存在P-JNK的激活，说明JNK的激活可能促进了脑胶质瘤的发生［5］。此外，在恶性脑胶质瘤组织屮，p38的总缶白表达和磷酸化水平均较正常脑组织明显上调，而且其表达水平与患者预后呈负相关；相反，抑制p38的活性则可导致肿瘤细胞侵袭性下降，并对化疗药物的反应性增强，说明人类

4、脑胶质瘤的发生与p38通路的激活密切相关［6］。因此，本实验拟在前期成功建立血肿瘤屏障体外模型的基础上，通过检测MAPKs信号通路ERK、pERK、p38、p-p38、JNK、P-JNK的表达，探讨天然冰什调控血肿瘤屝障通透性的分子机制，为冰八进一步应用于临床，改善脑胶质瘤化疗效梁提供理论依裾。1材料与方法作者简介:邢燕梅，女,硕士研究生，研究方向:中药有效性与安全性评价。Email：1041806838蜘iq.com。*通讯作者:张荣，副研究员，t内士虫导师。Email:zhangrongQgzucm.edu.cn。基金项目:国家自然科学基金课题(81173379)。1.1药

5、tii、试剂天然冰片（批号：080922）,吉安市林科天然冰片厂；胎牛血清（批号：16050-122）、马血清（批号：10099-141）,Gbico公司；F12k培养基（批号：21127-022）,Gbico公司；DMEM-fl2培养基（批号：SME001）,Hyclone公M;ERK兔多克隆抗体（批号：#9102），P-ERK兔单克隆抗体（批号：#4377）,p38兔单克隆抗体（批号：#8690），JNK兔单兑隆抗体（批号：abl79461）,p-p38（批号：#9216）,p-JNK小鼠单兑隆抗体（批兮：#9255）,B-actin兔多兑隆抗体（批号：AP0060），均购

6、于广州铎洋生物科技宥限公司；HRP标记的山羊抗兔二抗（批号：IH-0011），HRP标记的山羊抗小鼠二抗（批号：IF-0031）,北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；六孔Transwell（批号：3450），广州吉泰生物技术有限责任公司；BCA试剂盒（批号：PW0104）,莱德尔公司；WesternBoting缓冲液套装（批号：WP001），广州联科生物技术杏限公司；凝胶套装（批号：WP002）,广州联科生物技术有限公司；预染Marker（批号：PM0033）,北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；裂解液（批号：PC901）,莱德尔公司。1.2细胞系人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）

7、，购A中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库，10%胎十•血清的DMEM-fl2培养基常规培养；大鼠脑胶质瘤细胞株（C6）,购&屮国科学院上海细胞生物学研究所细胞库，含杏2.5%胎牛血清与15%马血清的F12k培养基行常规培养。1.3仪器多功能酶标仪，PerkinElmer公司；化学发光凝胶成像系统，BIO-RAD公nJ；垂直电泳仪，BIO-RAD公司；往复振动器，华利达公司。1.4BTB模型的制备和处理1.4.1C6细胞和HUVEC细胞井培养建立BTB模型24孔transwell板，按照说明