医学毕业论文以鼠尾胶为贴黏剂的小鼠淋巴管内皮细胞培养体系的建立

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1、以鼠尾胶为贴黏剂的小鼠淋巴管内皮细胞培养体系的建立姓名：2014年6月25日以鼠尾胶为贴黏剂的小鼠淋巴管内皮细胞培养体系的建立作者：章必成，王俊，赵勇，高建飞，郭燕，陈正堂【关键词】鼠尾胶；贴黏剂；内皮，淋巴管；细胞培养Establishmentofculturesystemformouselymphaticendothelialcellsadheredtorattailcollagen【Abstract】AIM:Toestablishaconvenient，cheapandstablecultures

2、ystemformouselymphaticendothelialcells(LEC).METHODS:MouselymphangiomasinabdominalcavitywereinducedbyincompleteFreundsadjuvant，thendisruptedanddigestedtoobtainLEC,whichwereculturedintheflaskorplatepreviouslycoatedwithrattailcollagen.ExpressionsofLECspecif

3、icmarkers，VEGFR3andLYVE1，wereidentifiedbyimmunofluorescence.TheproliferationactivityofLECwasevaluatedby3HTdRincorporationefficiencyandcelldoublingtime.ThecapabilityofLECtoformlymphaticvessellikestructureswasassessedbytheinvitrolymphaticvesselformationass

4、ay.RESULTS:MouselymphangiomasinabdominalcavitywereinducedsuccessfullybyincompleteFreundsadjuvant，andmorethan98%livingLECwereharvested.TheexpressionsofVEGFR3andLYVE1werepositiveinLEC.Intherattailcollagencoatedflaskorplate,LECgrewwell，with3HTdRincorporatio

5、nefficiencyincreasingobviouslyandcelldoublingtimebeing(42.7土3.2)h.Inthegelformedbyrattailcollagen，LECcouldformlymphaticvessellikestructures.CONCLUSION:MouseLECculturesystemusingrattailcollagenasadhesiveisaconvenient，cheapandstableculturesystem.【Keywords】

6、rattailcollagen;adhesive;endothelium，lymphatic;cellculture【摘要】A的：建立一个简便、廉价和稳定的小鼠淋巴管内皮细胞（LEC）培养体系.方法：应用不完全弗氏佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成，消化法分离获得LEC,置于自制的鼠尾胶包被的培养瓶（板）屮培养.以免疫荧光化学法检测LEC特异性标记物VEGFR3和LYVE1的表达，以3HTdR掺入率测定和细胞倍增时间检测LEC的增殖活力，以淋巴管形成试验判定LEC能否形成淋巴管样结构.结果：不完全弗氏佐剂能诱

7、导小鼠腹腔淋巴管瘤形成，所获LEC活细胞数大于98%.免疫荧光化学检测表明，LEC表达VEGFR3和LYVE1.在鼠尾胶包被的培养瓶（板）中，LEC生长状况良好，3HTdR摻入率明显增加，倍增吋间为（42.7土3.2）h;在鼠尾胶凝胶中，LEC能形成淋巴管样结构.结论：鼠尾胶为贴黏剂的体系是一种简便、廉价和稳定的小鼠LEC培养体系.【关键词】鼠尾胶；贴黏剂；内皮，淋巴管；细胞培养0引言淋B管内皮细胞（lymphaticendothelialcells,LEC）是构成淋巴管壁的主要结构，参与维持体液平衡、

8、调节淋巴细胞再循环和机体免疫反应等生理过程.近年研究表明，LEC还在伤门愈合、淋巴管水肿和炎症扩散等病理过程屮起重要作用，而且与肿瘤转移密切相关[1].但是，由于原代分离和体外培养LEC均比较困难，国内外有关此方面的报道较少，且多集中于牛、猪等大型动物和人身上，因此大大限制了人们对LEC的认识和研究.我们应用不完全弗氏佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤形成为细胞来源，以自制鼠尾胶作为贴黏剂培养LEC,R在建立一个简便、廉价和稳定的小鼠LEC培养体系.