头孢噻吩钠无菌检查法的研究

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1、头孢噻吩钠无菌检查法的研究【摘要】目的：依据中国药典2010年版无菌检查的相关规定，通过试验，建立头孢噻吩钠无菌检查法。方法:用规定各种试验菌，并用自-内酰胺酶进行试验。结果：头孢噻吩钠采用薄膜过滤法进行无菌检查，对大肠埃希菌有较强的抑菌活性。结论：头孢噻吩钠无菌检查需加入内酰胺酶来消除抑菌活性，以保证其无菌检查的准确性。【关键词】头孢噻吩钠无菌检查抑菌性内酰胺中国药典规定建立药品的无菌检查法时，应进行方学的验证。本文通过对头孢噻吩钠进行每一株试验菌的验证，证明所采用的方法有效的去除了其抑菌活性，可用于该药品的无菌检查。头孢噻吩钠为半合成的第一代头孢菌素抗菌，作用机理与青霉素相似，通过抑

2、制细胞壁合成而产生杀菌作用.本品为广谱抗生素。临床主要用于耐青霉素的葡萄球菌和其它敏感菌引起的感染，如呼吸道感染，尿路感染，皮肤软组织感染，败血症，骨髓炎，急性心内膜炎，脑膜炎，梅毒等.1材料与仪器(1)供试品：头孢噻吩钠(批号为：A201106001、A201106002、A201106003)哈药集团制药总厂。(1)培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养肉汤培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养琼脂培养基，奥星生物技术有限责任公司。(2)验证试验用菌种名称及编号：由中检所提供。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]；枯草芽孢杆菌(

3、Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501];大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]；生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)[CMCC(B)64941]；)1白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001];黑霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]o(3)内酰胺酶(酶活力不低于240万单位/ml):张家口市格瑞生物化学科技有限公司。(4)仪器和滤器：HTY-2000B全封闭集菌仪、全封闭集菌培养器(KSF330型/220型).杭州高得泰林责任技术有限公司。2准备菌液的制

4、备及菌液计数：(1)取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌新鲜培养物少许接种至营养肉汤培养基，生孢梭菌新鲜培养物少许接种至硫乙醇酸盐流体培养基，32.5±2.5°C培养18〜24小时，取该培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠，分别10倍稀释至约10-510-7之间，混匀备用。(1)取白色念珠菌新鲜培养物接种至改良马丁琼脂培养基，25.5±2.5°C培养48小时，取该培养物，用0.9%无菌氯化钠10倍稀释至约10-5,混匀备用。(2)取经23〜28°C培养5-7天的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加入3〜5ml含0.05%(ml/ml)吐温80的0.9%无菌氯化钠，将孢

5、子洗脱后，用管底部有一圆孔并带有薄的无菌棉花的无菌试管滤出孢子悬液至无菌空试管中，再用上述0.9%无菌氯化钠制成每1ml含菌数小于lOOcfu抱子悬液，混匀备用。(3)菌液计数：分别取上述6种菌液1ml分别加入培养皿中，每种菌液做平行2皿，注入相应的琼脂培养基15〜20ml。细菌30〜35°C培养48小时；真菌23〜28°C培养72小时。判断标准：每lml菌液中含菌量