脂肪变性供肝肝移植的实验分析

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1、第三军医大学博士学位论文脂肪变性供肝肝移植的实验研究脂肪变性供肝肝移植的实验研究摘要肝移植已成为治疗各种终末期肝病的有效方法在全世界广泛开展，移植例数和疗效均不断提高，很多终末期肝病病人等待供肝作移植，但人体供肝远不能满足临床需求。另一方面，很多轻微病损的供肝(如脂肪变性)因担心影响移植术后的疗效而丢弃。从而使本已匮乏的人体供肝资源更为短缺。临床上有关脂变供肝肝移植已见诸报道，一般认为术后易导致原发性植肝无功能。但其确切机制及对全肝移植或减体肝移植的影响远未阐明，亦缺乏有效的保护措施。我们以大鼠脂肪变性供肝为模型，研究脂变

2、供肝用于肝移植的合适病理类型、适宜的植肝量、术后肝再生及有效的预处理措施等，从而为进一步的实验研究奠定基础，为临床肝移植提供有用的参考和可能的治疗新线索。首先，应用高脂高胆固醇加酒精的方法建立了大鼠脂肪变性供肝的模型。结果显示：(1)大鼠造模4周、6周、8周分别出现I、II、Ⅲ级脂肪变性，病理主要以大泡性脂变为主，部分伴不同程度的炎症或坏死：(2)造模10周(或以上)时则以小泡性脂变为主：(3)脂变供肝肝内抗氧化能力下降而脂质代谢产物增加：(4)重度脂变时出现肝功能的异常。以上结果表明本实验方法可成功诱导大鼠脂变，与人类自

3、然发病类似，模型制作较简便，死亡率低。其次，应用上述不同级别的大鼠脂变供肝用于原位肝移植，观察术后存活率和合适的病理类型之间的关系。结果表明：(1)Ⅲ级大泡性脂变其术后的存活率低，大多死于早期的肝功能衰竭，肝细胞坏死多；(2)I级大泡脂交供肝术后生存率和健康供肝无明显差别，术后脂变可较快地逆转；(3)II级大泡性脂变供肝术后存活比健康供肝要低(2W存活率66．7％)，但检v1T第三军医大学博士学位论文脂肪变性供肝肝移植的实验研究验无显著性差别，术后病理示脂变不同程度减轻并有肝细胞再生：(4)小泡为主的脂变供肝其术后存活率反

4、而较高；(5)脂变肝脏炎症活动度计分大于2．7者术后的存活率低，采用此类供肝应慎重。第三，采用二袖套、胆管端端缝合法建立70％、60％、50％、40％和30％大鼠减体积性肝移植模型，观察正常供肝和脂变供肝术后受体鼠的生存时间、肝重，体重、移植肝／受体原肝的适宜比例及病理和超微结构改变。结果显示：(1)正常供肝全肝移植和70％、60％、50％、40％和30％大鼠减体移植的2周存活率分别为85％、80％、75％、60％、0、0；相应的GB、vR分别为3．53±0．36％、2．86±O．37％、2．45士0．25％、1．96±0

5、．26％、1．59±0．18％、1．22±0．23％；因此大鼠正常供肝减体移植GBwR应至少大于1．96±0．26％(50％ROLT)才有较高的存活率；(2)40％ROLT、30％ROLT术后早期虽有一定的再生，但常死于肝功能衰竭；(3)I级脂肪变的全肝移植和70％、60％、50％减体移植的l周存活率分别为91．67％，75％，75％，25％；2周存活率分别为83．33％，75％，58．33％，0；(4)II级脂肪变的全肝及70％ROLT的l周存活率分别为83．33％和25％；(5)小泡性脂肪变性为主的供肝其全肝及70％、

6、60％、50％减体移植的l周存活率分别为83．33％，75％，75％，33．33％；2周存活率分别为75％，66．67％，66．67％，0；(6)术后超微结构基本正常，病理可见肝再生及脂肪变不同程度的减轻或消失，中央静脉及肝窦扩张。研究表明：要获得较高的术后存活率，大鼠I级和以小泡性脂变为主的脂变供肝减体移植其GBWR应大于2．28±0．12％(即移植肝／受体原肝>60％)；而1I级脂变供肝不宜作为减体积性肝移植的供肝。第四，采用I级脂肝和正常供肝60％减体移植模型，通过免疫组化和流式细胞术来研究术后肝再生的动态变化。结果

7、表明：(1)脂变供肝减体移植术后的肝再生能力下降，增殖高峰时间延后；(2)PCNA和BrdU免疫组化结合流式细胞术可较好反映肝细胞的再生状况：(3)脂变供肝的脂质过氧化、能量合成障碍、肝窦微循环障碍等可能与再生受损有关。最后，针对脂肪变性供肝其能量代谢功能障碍和肝内抗氧化能力下降的特点，采用还原型谷胱甘肽术前短期大剂量预处理和冷保存时通氧的方VIn第三军医大学博士学位论文脂肪变性供肝肝移植的实验研究法来保护脂变供肝，观察其术后存活率的改变，并通过Annexin和PI凋亡双标记染色方法检测肝细胞凋亡和死亡的动态变化。结果表明

8、：(1)术前短期大剂量谷胱甘肽预处理和冷保存时静脉通氧可明显补充脂变供肝肝内GSH水平和增加ATP含量，保护肝窦状隙和改善微循环血流，并可明显提高肝移植的存活率：(2)脂变供肝移植术后肝细胞坏死占优势，而给予预处理后坏死减少，凋亡相对增多，供肝损伤较轻。综上所述我们可以得出如下结论：(1)大鼠I级脂变供