林荫银莲花多倍体种质培育和离体快繁分析

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1、林荫银莲花多倍体种质培育和离体快繁研究摘要林荫银莲花(AnemoneflaccidaFr．Schmidt)属银莲花属(Anemone)，以其干燥根茎入药，俗称地乌，具有祛风湿、助筋骨、消肿止痛等功效，开发意义巨大。在自然条件下林荫银莲花生长期短，生物量小，种子发芽困难，野生资源有限，急需实现人工栽培。本研究针对其种质资源缺乏的问题，以无菌苗叶片为外植体建立了离体叶的再生体系，并初步探讨了多倍体种质培育的方法。主要研究结果如下：(I)以根茎上萌发的芽为材料，用不同浓度秋水仙素(eolchicine)作为诱导剂，采用棉球包裹处理，然后栽培到土壤中

2、观察形态结构变化。结果表明，以O．2％浓度秋水仙素处理根茎萌发芽8d的诱导率最高，达81．67％，且死亡率低，是诱导多倍体材料的可行方法。(2)以根茎萌发芽为材料，消毒后在MS+2．0mg／L6-BA+0．2mg／LNAA+0．8％琼脂+3％蔗糖培养基上培养，然后转移到MS+1．0mg／L6一BA+0．3mg／LNAA+o鼍5mg／LKT+3％蔗糖+O．8％琼脂培养基上继代培养，再以不同浓度秋水仙素采用点滴法和浸泡法处理再生芽。结果表明，多倍体诱导率很低，最高诱变率仅达13％左右，“且死亡率高，最高达81．7％。(3)再生芽离体叶片在添加不同

3、浓度组合的细胞分裂素类物质6-BA与生长素类NAA的MS基本培养基上，并在光照和黑暗两种条件下培养，观察对外植体诱导、分化的影响。结果表明，在所有处理中均无愈伤组织产生，而是直接从叶片外植体上再生小芽；以在MS+I．5rag／L6．BA+0．2mg／LNAA+0．8％琼脂+3％蔗糖培养基上黑暗条件下培养的再生芽诱导率最高，达21．67％。光照虽对叶片外植体再生芽的诱导有一定影响，但对再生小芽数目影响不大。(4)以添加不同浓度组合的2，4．D与6-BA的MS为培养基，并在黑暗和光照两种条件下培养，结果显示，叶片外植体仍未被诱导产生愈伤组织，而是

4、直接再生出小芽；在黑暗条件下，以MS+2．5rag／L6．BA+0．2mg／L2,4．D+0．8％琼脂+3％蔗糖培养基的再生芽诱导率最高，可达28．33％；有光照条件下，再生芽诱导率略低，但对单个叶片外植体上再生芽数影响不大。(5)在MS基本培养基中添加O．1mg／L2,4．D和0．1mg,'LNAA与不同浓度6-BA组合，并在黑暗和光照两种条件下培养叶片外植体，结果表明，在黑暗条件下，以MS+I．5mg／L6．BA+0．1mg／L2,4．D+0．1mg／LNAA+o．8％琼脂+3％蔗糖为培养基的再生芽诱导率最高，可达32．78％，是目前叶片

5、再生芽诱导的最佳培养基。光照对初代再生芽的诱导仍有影响，但对再生小芽数量影响不大。华中农业大学2011届硕士研究生学位论文(6)将叶片再生小芽继代培养4次后，去除丛生芽上的大叶片，保留新生叶，接种到I／2MS+I．0mg／LNAA+o．8％琼脂+3％蔗糖的生根培养基中，分别在室温(19±2℃)光照、室温(19±2℃)黑暗及4"C黑暗下培养。结果表明，在4"C黑暗下培养生根率最高，可达70％。待根生长至0．5cm长度后，转入光下培养，可培育出健壮幼苗。关键词：林荫银莲花；秋水仙素；多倍体；离体快繁；植物生长调节剂Ⅱ林荫银莲花多倍体种质培育和离体

6、快繁研究AbstractAnemoneflaccidaFr．SchmidtisaspeciesofAnemonegenus．ThedriedrhizomeofA．flaccidalocallynamedas‘'Diwu”，isusedasaChinesetraditionalherbmedicinewithfunctionsofexpellingrheumatismdetumescence，relievingpain,andbeingconducivetothephysical．However,inthenaturalcondition，th

7、egrowthperiodofthisspeciesisveryshort,itsbiomassaccumulmionissmall，andseedsproutsdifficultly,whichresultinpoornaturalresource．Therefore，itisveryimportanttorealizecultivationofthespecies．Inthisstudy，thetechnologicalsystemsofmicro-propagationfromleafexplantinvitrowasstudiedfo

8、rfastpropagationofseedlingsandthepreliminarypolyploidywasinducedtoresolvetheproble