转基因抗草甘膦棉花室内发芽鉴定抗性方法

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1、转基因抗草甘膦棉花室内发芽鉴定抗性方法摘要：以2个转基因抗草甘膦棉花品系以及10个非转基因抗草甘膦棉花品种为材料，进行了室内发芽抗性鉴定。结果表明，含草甘膦溶液的沙床，对棉种的萌发无显著影响；置床8天时所有非转基因抗草甘膦棉花的试验品种均发芽不成苗且无侧根，偶有成苗也是矮小无侧根的畸形苗，且所有萌发的棉种均有明显不规则干枯凹陷的药害症状；转基因抗草甘膦棉花的试验品系均无药害症状，证明利用室内发芽试验鉴定转基因抗草甘膦棉花抗性的方法是准确可行的。关键词：转基因抗草甘膦；棉花；室内发芽；鉴定方法中图分

2、类号：S562.043文献标识号：A文章编号:1001-4942(2013)01-0114-03转基因抗除草剂作物的培育已成为现代生物技术发展的一个重要方向［1］。草甘膦是一种可被茎叶内吸传导、广谱灭生型除草剂，是世界上应用规模最大的除草剂品种之一［2,3］。草甘膦还具有水剂质量稳定、易稀释、施药方便、生产使用成本低、对人畜低毒等多项优点，深受广大用户欢迎。种植转基因抗草甘膦棉花可以大量减少除草用工，降低劳动强度，减少植棉成本，因此，研究应用转基因抗草甘膦棉花，对增加棉花产业的经济效益具有重要意义

3、。全球抗草甘膦棉花品种早在1997年时已经问世［2〜4］，而我国对转基因抗草甘膦棉花的研究起步较晚，推广应用的面积更是有限，预计不久的将来一定会有突破。为及时有效地鉴定转基因抗草甘膦棉花品种的抗性，我们以2个转基因抗草甘膦棉花品系以及10个非转基因抗草甘膦棉花品种为材料，进行了转基因抗草甘膦棉花室内发芽鉴定抗性方法的初探。1材料与方法11试验材料转基因抗草甘膦棉花的2个品系008、009;非转基因抗草甘膦棉花的10个品种华棉3号、华棉5号、鲁棉研24号、诺华棉1号、思壮棉3号、楚棉608、冀创18

4、、苏棉26、瑞杂816、新植杂2号；41%的草甘膦异丙胺盐水剂。12试验方法121鉴定草甘膦的真实性将41%草甘膦异丙胺盐水剂有效成分的800倍液，向非转基因抗草甘膦棉花的棉苗顶心嫩叶喷施，3日后观察。122寻找适宜药液浓度的沙床及转基因抗草甘膦棉花品系与非转基因抗草甘膦棉花品种间的差异取用非转基因抗草甘膦棉花的华棉5号和转基因抗草甘膦棉花的009系棉种，分别置于6种不同浓度草甘膦异丙胺盐溶液（有效成分的100、200、400、800、1200倍液、清水对照）的沙床进行室内发芽对比试验，重复2次。

5、将各浓度的药液（按1000g沙子中加入100ml药液的比例）倒入005〜08mm砂径的细沙中，充分混匀，平铺发芽盒内厚约25cm;将转基因抗草甘勝的棉花品系009和非转基因抗草甘膦的棉花品种华棉5号，分别取12份，每份种子100粒，均匀摆入发芽盒内沙床之上，轻压种子使之与沙面相平，分别用相应药液浓度的沙子覆盖lcm厚。贴好标签，放入25〜30°C的发芽箱进行发芽。观察记录试验种子的出苗情况。将每个处理的所有种子从沙床中取出，分别记录正常棉苗、畸形苗（芽）、新鲜不发芽种子、霉烂籽、棉种萌发总数（即正

6、常棉苗与畸形苗的和）0123品种验证试验根据上述试验结果选择一个适宜浓度（41%草甘膦异丙胺盐水剂有效成分的800倍液），用转基因抗草甘膦棉花品系008、009和非转基因抗草甘膦的棉花品种华棉3号、华棉5号、鲁棉研24号、诺华棉1号、思壮棉3号、楚棉608、冀创18、苏棉26、瑞杂816、新植杂2号进行验证试验，重复2次。观察记录试验种子的出苗情况。将每个处理分别记录正常棉苗、畸形苗（芽）、新鲜不发芽的种子、霉烂籽、萌发棉芽受药害数。2结果与分析21鉴定草甘膦真实性的试验结果经观察，喷施41%草甘

7、膦异丙胺盐水剂有效成分800倍液的棉苗3日内未出现萎蔫状，3日后心叶明显发黄，生长受抑制，顶部嫩叶边缘失绿黄化，表明供试草甘膦异丙胺盐水溶液是纯正单一的药液，并未有复配其它除草剂，可以用此瓶药液进行试验。22室内发芽试验结果所有药液处理对棉种萌发均无显著影响，各处理棉种萌芽总数均在70%以上（表1）。方差分析结果F=172