生脉注射液细菌内毒素检查方法的探讨

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1、生脉注射液细菌内毒素检查方法的探讨王欣放（辽宁省朝阳市食品药品安全监督所122000）【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）25-0213-02【摘要】目的建立牛脉注射液的细菌内毒素检查方法。方法采用《中国药典》2010年版附录检测细菌内毒素的凝胶法。用不同厂家的蛍试剂与同厂家和不同厂家牛产的牛脉注射液分别进行干扰试验，考察牛脉注射液对细菌内毒素检查的干扰作用，确定其最小不干扰稀释倍数。结果实验证明，生脉注射液对细菌内毒素检查有抑制作用，经稀释至40倍后

2、干扰作用完全被消除。结论使用蛍试剂凝胶法检查牛脉注射液的内毒素是可行的，可以用细菌内毒素检查法取代原检查法。【关键词】生脉注射液凝胶法细菌内毒素蛍试剂干扰试验生脉注射液临床上主要用于心绞痛、失血性、感染性休克、心律失常、心肌炎、低血压等病证的治疗。现行质量标准为卫牛部药品标准规定的检查项为热原检查法⑴，木文对生脉注射液采用细菌内毒素法进行可行性研究，为其建立细菌内毒素检查法提供试验依据。现将研究结果报告如下。1试验材料与仪器设备ZH-2型自动旋涡混合器（天津药典标准仪器厂）；DR-HW-1电热恒

3、温水浴箱（天津医疗器械厂）；鳖试剂（TAL）[湛江安度斯牛物有限公司批号：1110026灵敏度（λ）:0.25Eu•ml-l；批号：1112082,灵敏度（λ）：0.125Eu•ml-1；湛江博康海洋牛物有限公司批号：1106120,灵敏度（λ）：0.25Eu•ml-l批号：1104110,灵敏度（λ）：0.125Eu•ml-l]细菌内毒素检查用水（中国药品牛物制品检定所批号：201112规格:10m

4、l/支）细菌内毒素工作标准品（中国药品牛物制品检定所批号:150601-201174160Eu/支）生脉注射液（山西太行药业股份有限公司批号：110222.110514.110424规格：10ml/支；上海和黄药业有限公司批号:20110411.20110215.20110806规格：10ml/支）。2方法与结果2.1蛍试剂灵敏度复核按细菌内毒素检查法⑵“賞试剂灵敏度复核试验”项下操作，4批蛍试齐!Jλc均在0.5λ一2.0λ之间表明灵敏度符合规定，可用

5、于试验。2.2细菌内毒素限值确定［2］按照细菌内毒素限值公式L=K/MK为按规定的给药途径，人用每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，注射剂为5.0Eu/kg•h・l,M为人用每公斤体重每小时的最大供试品剂量。生脉注射液为60ml,成人体重按60kg计，计算L=5.0/60/60=5Eu•ml-lo2.3干扰试验预试验。按照细菌内毒素检查法［3］进行干扰预试验，根据公式MVD=C•L/λ确定供试品的有效稀释倍数范围。现今我国市售TAL灵敏度通常为0.

6、5-0.03Eu/ml,根据公式MVD=C•L/λ计算出供试品的有效稀释倍数范围为：10-160倍。用细菌内毒素检查用水分别将两个厂家的生脉注射液依次稀释成10,20,40,80,160倍系列浓度的药液，记作（NPC）系列，另制备同样系列浓度的供试液,并使每一供试液均含有2λ浓度（0.5Eu•ml-l）的内毒素溶液记作（PPC）系列•每一浓度设两管，取λ：0.25Eu•ml-1蛍试剂分别与上述NPC和PPC系列溶液反应，并同

7、时作阴性对照和阳性对照结果见表1表1干扰预试验结果蛍试剂厂家供试品批号系列供试品稀释倍数10204080160NCPC湛江安度斯生物有限公司110222NPCPPC++++++110514NPCPPC・・+・++++++110424NPCPPC++++++20110411NPC++PPC——+++++++20110215NPCPPC…・++++++20110806NPCppc—+++++++湛江博康海洋生物有限公司110222NPC++PPC++++++110514NPC-PPC・・+・++++

8、++110424NPCPPC++++++20110411NPC++PPC・・+・++++++20110215NPC——PPC——+++++++20110806NPCPPC・・+・++++++表1结果表明，阴性对照为阴性，阳性对照为阳性，实验有效。生脉注射液对TAL与内毒素反应在稀释倍数在20倍以下时存在较强抑制作用，当供试品稀释倍数在40倍以上吋无干扰（NPC两管为阴性PPC两管为阳性），选用两个厂家的蛍试剂，不同厂家的6个批次的供试品结果一致，以此稀释倍数作正式干扰试验。2.4供试品的干扰试验