brmc对肝癌相关巨噬细胞诱导smmc7721细胞系干样细胞特性的影响

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1、优秀毕业论文分类号学校代码!Q5生2学号2Q13Q21皇!生2鱼BrMC对肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC．7721细胞系干样细胞特性的影响Effectsof8-bromo．．7．．methoxychrysinonstem—likecharacteristicsofSMMC一7721celllineinducedbylivertumor—associatedmacrophages研究生姓名孙妹雯指导教师姓名、职称萱蕉国整撞学科专业生药堂研究方向抗肿瘤药物蓥墨湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一六年五月精品参考文献资料优秀毕业论文万方

2、数据精品参考文献资料优秀毕业论文IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIlY3085607摘要目的：研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8．bromo-7-methoxychrysin，BrMC)对肝癌相关巨噬细胞极化表型以及肝癌相关巨噬细胞诱导人肝细胞癌SMMC．7721细胞系细胞自我更新、干细胞标志物表达、迁移和侵袭等特性的影响，并探讨BrMC调节肝癌相关巨噬细胞NF．r．B表达与其逆转肝癌相关巨噬细胞极化表型和抑制肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC．7721细胞系肝癌干样细胞特性之间的关联性。方法：SMMC．7721细胞系第3代球形

3、成细胞鉴定作为肝癌干样细J抱(1ivercancerstem．1ikecells，LCSLCs)模型，并收集LCSLCs条件培养基(LCSLC-CM)。以佛波酯(PhorbolM[yristateAcetate，PMA)活化的体外培养人T肿一l单核细胞系细胞为THP．1源性巨噬细胞，用LCSLC．CM处理的THP．1源性巨噬细胞作为肝癌相关巨噬细胞或者在Ttranswell小室与LCSLCs共培养系统中活化THP．1源性巨噬细胞为肝癌相关巨噬细胞。LPS与INF-Y处理THP-l源性巨噬细胞作为经典活化M1型巨噬细胞对照。不同浓度

4、BrMC(0、5、10、20pmol／L)处理LCSLCs或LCSLCs／THP．1源性巨噬细胞共培养系统观察药物干预效应。NF．r,B特异性抑制剂SN50用于探讨BrMC药理作用机制。比较肿瘤球形成率测定细胞自我更新能力，Westernblot分析干细胞标志物CDl33和CD44蛋白的表达，划痕法和Tmnswell小室侵袭试验检测细胞迁移和侵袭能力。细胞免疫荧光染色和Westem．blot分析巨噬细胞表面标志蛋白CD68和M2型巨噬细胞即肝癌相关巨噬细胞表面标志蛋白CDl63表达。ELISA测定肝癌相关巨噬细胞条件培养基细胞因子

5、几．10、IL．12、VEGF、MMP．9浓度；Griess法测定培养基NO水平。结果：1．与亲本细胞相比，第3代人肝细胞癌SMMC．7721细胞系球形成细胞高精品参考文献资料优秀毕业论文万方数据精品参考文献资料优秀毕业论文表达CDl33和CD44干细胞标志蛋白，更高肿瘤球形成率，具有肝癌干样细胞特性。2．LCSLC．CM或与肝癌干样细胞共培养能有效诱导体外培养THP-1源巨噬细胞转分化为肝癌相关巨噬细胞。与M1型巨噬细胞相比，肝癌相关巨噬细胞高表达CDl63蛋白：细胞分泌谱为Ⅲ．10“汹、几．1210w、VEGFMgh、MMP．

6、9Mgh；且NO释放减少，呈现出M2型巨噬细胞极化表型。3．肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞／THP．1源巨噬细胞共培养条件培养基有效诱导SMMC．7721细胞自我更新、干细胞标志蛋白表达、体外细胞迁移和侵袭。4．BrMC以浓度依赖方式降低肝癌相关巨噬细胞CDl63表达，逆转肝癌相关巨噬细胞M2型巨噬细胞极化相关细胞因子分泌谱。5．BrMC以浓度依赖方式抑制肝癌相关巨噬细胞条件培养基诱导SMMC．7721细胞CDl33和CD44蛋白表达，肿瘤球形成和体外细胞迁移和侵袭作用(P<0．05)。6．特异性NF-r,B抑制剂SN5

7、0以浓度依赖方式降低肝癌相关巨噬细胞NF—r,B(p65)蛋白表达水平妒<0．05)；同时，SNS0与BrMC协同拮抗肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞厂rHP．1源巨噬细胞共培养条件培养基诱导SMMC．7721细胞自我更新、干细胞标志蛋白表达、体外细胞迁移和侵袭作用。结论：1．肝癌干样细胞条件培养基或肝癌干样细胞／THP-I源性巨噬细胞共培养促成THP．1源性巨噬细胞M2型极化。2．肝癌相关巨噬细胞条件培养基或肝癌干样细胞／THP-1源性巨噬细胞共培养条件培养基诱导SMMC．7721细胞系细胞自我更新、干细胞标志物表达、迁

8、移与侵袭等肝癌干样细胞特性。Ⅱ精品参考文献资料优秀毕业论文万方数据精品参考文献资料优秀毕业论文3．BrMC具有逆转肝癌相关巨噬细胞M2极化表型作用。4．BrMC具有抑制肝癌相关巨噬细胞诱导SMMC．772I细胞肝癌干样细胞特性作用。5．BrMC逆转