生物：5.1dna的粗提取和鉴定学案1新人教版选修1

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1、课时1DNA的粗提取与鉴定一、实验目的：初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。二、实验原理：1．DNA的溶解性：思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解，但对没有影响。大多数蛋白质不能忍受℃的高温，而DNA在℃以上才会变性。能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。3．细胞在中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。4．DNA的鉴定：思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？三、实验材料：鸡血细胞

2、液思考题4：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？四、实验步骤：1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的溶液，离心处理；2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤；思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌；思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？5．滤取含DNA的黏稠物：过滤；思考题7：这次过滤与上

3、次过滤的目的一样吗？为什么？6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤；思考题8：这一步骤的目的是什么？思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？8．提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌；思考题10：这一步骤的目的是什么？思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？第-3-页共3页9．DNA的鉴定：取两支试管，各加入0．015mol/L的氯化钠溶液5mL，一支加入提取的DNA，两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热

4、。思考题12：为什么要设置对照组？实验中能观察到什么现象？五、课堂练习：1．为了便于提取鸡血细胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血液加入（）A．蒸馏水B．ATPC．0.3g/mL的蔗糖溶液D．二氧化碳2．下列不适宜作为DNA提取的实验材料是（）A．鸡血细胞B．蛙的红细胞C．人的成熟红细胞D．菜花3．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的DNA．这是因为：（）　　A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精C．DNA

5、和滤液中其他成分更易溶于酒精D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精4．（多选）下表是关于DNA粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述，正确的是：（）试剂操作作用A柠檬酸钠溶液与鸡血混合防止血液凝固B蒸馏水与鸡血细胞混合保持细胞形状C蒸馏水加入到溶解有DNA的NaCl中析出DNA丝状物D冷却的酒精加入到过滤后DNA的NaCl中产生特定的颜色反应5．在进行DNA粗提取实验时，为得到含DNA的黏稠物，某同学进行了如下操作：①在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸，经离心后，除去血浆留下血细胞备用。②取5―10ml血细胞放入50ml的塑

6、料烧杯中，并立即注入20ml0.015mol／L的氯化钠溶液，快速搅拌5分钟后经滤纸过滤，取得其滤液。③滤液中加入40ml2mol／L的氯化钠溶液，并用玻璃棒沿一个方向快速搅拌1分钟。④上述溶液中缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，直到溶液中出现丝状物为止，再进行过滤而得到含DNA的黏稠物。实验结果是：所得到的含DNA的黏稠物极少，导致下一步试验无法进行。（1）指出并改正上述实验操作中的错误：　　　　　　　　　　　，　　　　　　　　　　　　　　　，　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。(2)要进一步提取

7、DNA时，需加入冷却的酒精，其作用是　　　和　　　　　　　。(3)能否用牛血或牛肝代替鸡血做实验？　　　　　　为什么？　　　　　　　　　　　　　6．在DNA粗提取与鉴定的实验中，选择适当浓度的NaCl溶液就能充分溶解DNA而使杂质沉淀，或析出DNA过滤去除溶液中的可溶性杂质。请在右图中作出DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线。第-3-页共3页参考答案思考题：思考题1、DNA在氯化钠溶液中的溶解度，随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0．14mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的

8、DNA析出；思考题2、DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精，利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步地分离。思考题3、DNA遇二苯胺（沸水浴）被染成蓝色，所以可用二苯胺作鉴定。思考题4、不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，仅靠白细