基因工程的基本工具a

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1、基因工程的基本工具（A）［知识梳理］实现这一精确的操作过程至少需要三种工具即准确切割DNA的“手术刀”——限制性核酸内切酶、将DNA片段再连接起来的“缝合针”——DNA连接酶、将体外重组好的DNA导入受体细胞的“运输工具”——（运）载体（一）、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1、又称限制酶或（限制性内切酶）2、主要是从原核生物中分离纯化出来的（不是说只有原核生物中有、是原核生物的防御机制)3*、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，（大多数限制酶识别序列6个核苷酸组成）并在特定的切点（两个核苷酸之间的磷酸二酯键）上切割DNA分子（体现酶的专一性；注意与解旋酶的区别）4

2、、切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——错位切：产生黏性末端。平切：产生平口末端。例：1）GAATTC(写出)CTTAAG2)CCCGGGGGGCCC(二)DNA连接酶——“分子缝合针”1、两种来源不同的DNA用同种限制酶切割后，末端可以相互黏合，这种只能使互补的碱基连接起来，脱氧核糖和磷酸交替连接而构成的DNA骨架上的缺口（磷酸二酯键），需要靠DNA连接酶来“缝合”。2、根据酶的来源不同，可以将这些分为两类：一类：从大肠杆菌中分离得到的，称为E·coliDNA连接酶；只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间起来另一类；从T4噬菌体中分离出来的，称T4DNA连接酶；既可

3、以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”平末端，但连接平末端之间的效率比较低。（三）基因进入受体细胞的（运）载体——“分子运输车”1、通常利用质粒，质粒存在于许多细菌以及酶母菌等生物中。质粒是独立于细菌（细胞）染色体外（即拟核DNA）之外，具有自我复制能力的双链环状DNA分子。质粒上有决定固氮、抗药性、抗生素生成的基因（可作为标记基因）。52、作为运载体的特点：1）、有一个到多个限制酶的切割位点；(供外源DNA片段(基因)插入其中)2）、能进行自我复制；(在细胞中自称复制，或整合到染色体DNA上，随染色体进行同步复制)。3）、有标记基因、如抗四环素、氨苄青霉

4、素等标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。4）、不对受体细胞有害；5）大小适合。3、使用的载体除质粒外，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。4、真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。［随堂记忆］基因工程是又叫做基因拼接技术或______________技术。通俗地说，就是按照人们的意愿，把_______________________出来，加以______________________后放到__________________里，。（理论基础是____________________）实现这一精确的操作过程至少需要三种工具:即准确切割DNA的“手术

5、刀”——、将DNA片段再连接起来的“缝合针”——、将体外重组好的DNA导入受体细胞的“运输工具”——（一）、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1、又称____________或（_______________________）2、主要是从_____________中分离纯化出来的（不是说只有原核生物中有）3*、一种限制酶只能识别_____________________，（大多数限制酶识别序列6个核苷酸组成）并在_____________________（______________________________键）上切割DNA分子（体现酶的______________

6、_性；注意与解旋酶的区别）4、切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——_____________和____________(二)DNA连接酶——“分子缝合针”1、两种来源不同的DNA用切割后，末端可以相互黏合，这种只能使互补的碱基连接起来，脱氧核糖和磷酸交替连接而构成的DNA骨架上的，需要靠DNA连接酶来“缝合”。2、根据酶的来源不同，可以将这些分为两类：一类：从大肠杆菌中分离得到的，称为_________________________________；只能将双链DNA片段互补的_____________________之间起来另一类；从T4噬菌体中分离出来的，称__

7、__________________________；既可以“缝合”双链DNA片段互补的___________，又可以“缝合”___________，但连接平末端之间的效率比较低。（三）基因进入受体细胞的（运）载体——“分子运输车”51、通常利用__________________，质粒存在于许多细菌以及酶母菌等生物中。质粒是独立于细菌（细胞）___________外（即拟核DNA）之外，具有_________________的双链______________________分子。质粒上有决定_________________