基因工程的基本工具

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1、基因工程的基本工具基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在____分子水平上进行设计和施工的，又叫做________________DNADNA重组技术。（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）2.“分子缝合针”——DNA连接酶3.“分子运输车”——载体1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的_

2、________断开，因此具有____________。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：__________________________________磷酸二酯键专一性黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较：①相同点：都缝合____________。②区别：E•coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的____末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合_____末端，但连接平末端的之间的效率较______。磷

3、酸二酯键黏性低黏性和平3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体是_______,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链________分子。（3）其它载体：___________________质粒环状DNA噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取第二步：基因表达载体的构建第三步：将目的基因导入受体细胞第四步：目的基因的检测和鉴定第一步：目的基因的

4、获取1.目的基因是指：__________的结构基因原核基因采取_______获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有_______法和_________法。编码蛋白质直接分离反转录化学合成①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：_______________________前提条件_______________、___________、_________________________________.②原理：__________④方式：以_____方式扩增，即___

5、_（n为扩增循环的次数）⑤结果：聚合酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制一段已知目的基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸一对引物热稳定DNA聚合酶（Taq酶）指数2n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增(二)利用PCR技术扩增目的基因第二步：基因表达载体的构建组成：复制原点+启动子+目的基因+终止子+标记基因