抗sars冠状病毒s1蛋白n端249至667的单克隆抗体的制备与

《抗sars冠状病毒s1蛋白n端249至667的单克隆抗体的制备与》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、抗SARS冠状病毒S1蛋白N端249至667的单克隆抗体的制备与鉴定作者：温坤1；梅亚波1；丘立文1；廖志勇1；袁国勇2；车小燕1　　(1第一军医大学珠江医院中心实验室，广东  广州510282；2香港大学微生物学系，香港)摘要：目的  在获得了具有免疫原性的SARS冠状病毒S1蛋白片段的基础上，制备和鉴定特异性抗该段S1蛋白单克隆抗体(mAb)。方法  原核表达含S蛋白受体结合区的SARS冠状病毒S1蛋白片段S1c(N端249-667氨基酸残基)，其免疫原性经SARS病人恢复期血清鉴定后免疫BALB/c小鼠，按常规方法制

2、备单克隆抗体，并采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定。结果  筛选出3株特异性针对SARS冠状病毒S1蛋白N端249-667的mAb杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定1株为IgG1，2株为IgG2a，经免疫荧光鉴定与人冠状病毒株229E和OC43无交叉反应。结论  获得3株抗SARS冠状病毒S蛋白受体结合区特异性单克隆抗体，为建立新的SARS冠状病毒检测方法的和进一步研究S蛋白的功能奠定了基础。关键词：SARS冠状病毒；单克隆抗体；刺突蛋白；受体结合区Preparationandcharacterization

3、ofmonoclonalantibodiesagainstS1domainatN-terminalresidues249to667ofSARS-associatedcoronavirusS1proteinWENKun1；MEIYa-bo1；QIULi-wen1；LIAOZhi-yong1；YuenKwok-yung2；CHEXiao-yan11CentralLaboratory,ZhujiangHospital,FirstMilitaryMedicalUniversity,Guangzhou510282,China;2De

4、partmentofMicrobiology,UniversityofHongKong,HongKong,China.Abstract:Objective  Toprepareandcharacterizemonoclonalantibodies(mAbs)againstS1proteinofsevereacuterespirato-rysyndrome(SARS)-associatedcoronavirus(SARS-CoV).Methods  6-His-taggedrecombinantfragmentatN-ter

5、minalresidues249to667ofSARS-CoVS1proteinincludingS-proteinreceptor-bindingdomainwasexpressedinE.coli.Theim-munogenicityofthisS1domainwasidentifiedandusedtoimmunizeBALB/cmicefortheproductionofhybridomas.TheidentificationofthemAbsagainstthisS1domainwasperformedusing

6、indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA),indirectimmunofluorescenceassay(IFA)andWesternblotting,respectively.Results  ThreehybridomasproducingmAbsspe-cifictotheS1domainwasobtained,witharelativemolecularmassof48500.Noneofthe3mAbswerereactivewithhumancoronavir

7、uses229EandOC43.TwoofthemAbswereIgG2aisotype,andtheotherwasIgG1.Conclusion  Thisisthefirstre-portofmAbsproducedagainstS-proteinreceptor-bindingdomainofSARS-CoV.The3S1-specificmAbsmaybeusefulforfurtherstudyofthefunctionoftheSproteinandfordiagnosisofSARS-CoVinfectio

8、n.Keywords:severeacuterespiratorysyndrome-associatedcoronavirus;SARS-CoV;monoclonalantibody;spikeglycoprotein;receptor-bindingdomainReceived:2004-01-03T