db51t 716-2007 棉花黄萎病检验鉴定技术规程

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1、DB××/T××××—××××四川省质量技术监督局发布2007-12-1实施2007-11-1发布棉花黄萎病检验鉴定技术规程RuleofDetectionMethodforVerticilliumdahliaeKleb.DB/T716—2007DB51四川省地方标准ICS67.080.20B161DB/T716—2007目次前言II1范围12规范性引用文件13术语和定义14原理15试剂与材料16仪器及用具27取样方法28典型症状识别29实验室检验310结果判定311样品保存与处理4附录A5附录B6IIDB/T716—2007前言本标准的附录A是规范性附录，附

2、录B是资料性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准起草单位：四川省农业厅植物检疫站。本标准主要起草人：宁红、谢成伦、夏季、陈素清、熊玉兰、帅波、颜达。II棉花黄萎病检验鉴定技术规程RuleofDetectionMethodforVerticilliumdahliaeKleb.1　范围本标准规定了棉花黄萎病（Verticilliumdahliae）检验取样方法、田间症状识别、实验室检验、结果判断及样品保存与处理的技术要求。本标准适用于棉花黄萎病的检验和鉴定。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后

3、所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB15569《农业植物调运检疫规程》3　术语和定义下列术语和定义适用于本标准3.1　大丽轮枝菌VerticilliumdahliaeKleb.一种引起棉花黄萎病的土壤真菌。属半知菌亚门（Deuteromycotina）丝孢纲（Hyphomycetes）丛梗孢目（Moniliales）丛梗孢科（Moniliaceae）。3.2　微菌核microsclerotium大丽轮枝菌生长过程中，由

4、一条或数条菌丝体进行分隔、膨大、胞壁增厚，并向各个方向芽殖形成的肉眼可见的黑色菌丝颗粒。3.3　选择性培养基selectiveculture进行植物病原真菌或细菌分离培养时,为促进目标菌落的形成，抑制其它非目标菌的生长，在培养基中添加不同的碳源、氮源或抑制性物质而形成的具有一定选择能力的培养基。4　原理棉花黄萎病是一种土传病害，其病原菌大丽轮枝菌主要在土壤、病残组织、粪肥等处越冬，病原菌同时可以潜伏于种子内部和附着于种子表面，以菌丝或微菌核形式在种子内外越冬。棉花植株所表现的病害典型症状特征是进行棉花黄萎病田间诊断的初步依据；采用选择性培养基，从不同的带菌材

5、料中分离出大丽轮枝菌VerticilliumdahliaeKleb.，根据病原菌形态特征最终进行棉花黄萎病鉴定。5　试剂与材料除非另有说明，在本标准中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。61.1　磷酸氢二钾K2HPO41.2　氯化钾KCl1.3　硫酸镁MgSO41.4　乙二胺四乙酸铁钠[CH2N(CH2COO)2]2FeNa1.5　L-天门冬酰胺C4H8N2O3H2O1.6　L-山梨糖C6H12O61.7　琼脂Agar1.8　75%五氯硝基苯C6Cl5NO21.9　牛胆盐cowtilesalt1.10　四硼酸钠Na2B4O7·10H2O1

6、.11　硫酸链霉素C21H41N7O16S1.12　葡萄糖C6H12O6.H2O5.12马铃薯potato2　仪器及用具天平、高压灭菌锅、培养箱、生物显微镜、微量移液器、移液器、解剖刀、接种棒、培养皿、烧杯、载玻片、盖玻片、吸管等。3　取样方法3.1　种子取样需要进行室内棉花黄萎病检验的棉籽，按GB15569《农业植物调运检疫规程》6.1的要求进行取样，填写完整的取样标签，送实验室检验鉴定。3.2　受害植株取样在棉花生长期间，特别是现蕾后棉花黄萎病发病高峰期，加强田间观察，发现有棉花黄萎病典型症状或疑似症状的植株，整株取样送实验室检验鉴定。3.3　土壤取样3

7、.3.1　定点取样对具有棉花黄萎病典型症状或疑似症状的植株，直接取植株根部周围0.3m2范围内、5cm深的表土，四分法制样后，取土样约500g送实验室检验。3.3.2　随机取样对棉花黄萎病发生田块进行整田病原调查时，对角线5点取样，每点在2m2范围内取5cm深的表土约1000g，将各点土样混和后，四分法制样，取土样约500g送实验室检验。4　典型症状识别4.1　幼苗期症状一般在3至5片真叶期显示症状，病株比正常植株略矮，叶片上出现斑驳。4.2　成株期症状棉花黄萎病大多在现蕾后开始发病，7-8月开花结蕾期达到发病高峰。病株从下部开始发病，逐渐向上发展，病叶边缘

8、和叶脉之间叶肉部分出现淡黄色斑驳，形状不规则，逐渐扩