植物组织中总dna的提取实验报告

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划植物组织中总DNA的提取实验报告　　实验1：植物基因组DNA的提取　　实验目的　　掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。　　实验原理　　通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎

2、，并减少研磨过程中各种酶类的作用。　　十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethylammomumbromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，阴离子去污剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀

3、DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。　　材料、设备及试剂目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　一、材料　　不同来源的植物材料。　　二、设备　　移液器及吸头，离心管，陶瓷研钵，水浴锅，台式高速离心机。　　三、试剂：　　2%CTAB抽提缓冲溶液:CTAB4g，NaCl，1MTris－HCl20ml()，8ml，先用70

4、mlddH2O溶解,再定容至200ml灭菌,冷却后加入%2-巯基乙醇；　　1MTris－HCl:1)称量置于1L烧杯中。2)加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。3)按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。　　pH值浓HCl　　约70mL　　约60mL　　约42mL　　4)将溶解定容至1L。5)高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力

5、，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　:1)称取，置于1L烧杯中。2)加入约800mL的去离子水，充分搅拌。3)用NaOH调节pH值值。注意：pH值至时，EDTA才能完全溶解。4)加去离子水将溶液定容至1L。5)适量分成小份后，高温高压灭菌。6)室温保存。　　氯仿－异戊醇：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可；异丙醇　　3M的醋酸钠:□配制量100mL□配置方法1)称取?3H2O置于100

6、～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。　　2)加入冰乙酸调节pH值至。3)加入去离子水将溶液定容至100mL。4)高温高压灭菌后，室温保存。　　无水乙醇、75%乙醇　　TE缓冲液　　凝胶电泳上样缓冲液溴化乙锭溶液:【配制方法】在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。【注意】小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。　　1×TAE凝胶电泳缓冲液　　先配50*的TAE：称下列试剂加入到

7、1L烧杯中：tris242g，，然后加入800ml的去离子水，充分搅拌溶解。加入的醋酸，充分混匀。加去离子水定容至1L，室温保存。　　需要使用的时候，稀释为1*的，例如：需要使用200ml的1*TAE，则量4ml　　的50*TAE，196ml的去离子水，混匀即可。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　RNaseA的配制：R

8、NaseA溶于10mMTris-Cl、15mMNaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100℃加热15分钟，缓慢冷却到室温，分装成小份保存于-20℃。　　操作步骤　　一、CTAB法提取植物DNA　　(1)首先将植物组织洗净，2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。　　(2)取少量叶片置于灭过菌的研钵中