质粒选有报告基因

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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划质粒选有报告基因　　2．质粒DNA和病毒DNA作为载体的主要特征是什么　　为外源基因提供进入受体细胞的转移能力；为外源基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力；为外源基因提供在受体细胞中的扩增和表达能力；具有多种单一的核酸内切酶识别切割位点，具有合适的选择标记　　3．如何理解质粒的不相容性及其在DNA重组克隆过程中的运用意义　　质粒的不相容性：具有相同或相似复制子结构及调控模式的两种不同的质粒不能稳定存在于同一受体细胞内.　　

2、4．列举表达质粒、穿梭质粒、探针质粒和cos质粒的不同用途　　表达质粒:在多克隆位点的上下游分别装有两套转录效率较高的启动子、合适的核糖体结合位点序列序列以及强有力的终止子结构，使得克隆在合适位点上的任何外源基因均能在受体细胞中高效表达。穿梭质粒：质粒分子上含有两个亲缘关系不同的复制子以及相应的选择性标记，能在两种不同的受体细胞中复制并检测。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安

3、保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　探针质粒：用来筛选克隆基因的表达调控元件。通常含有报告基因，但缺少相应的调控序列，只有含有启动子或终止子的调控序列被克隆进入载体后，报告基因才能别表达，表达量的大小直接反应了克隆进入的调控元件的强弱。　　cos质粒：人工构建的含有λDNA的cos位点序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体。具有大的装载量，可以用于构建基因组文库。　　5．II类限制性核酸内切酶的主要酶学特征是什么　　分子量较小的单体蛋白，双链识别和切割活性仅需Mg，识别位点为4-6个bp的回文序列，切割位点在识别序列中或靠近识别序

4、列　　7．KLenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构和功能上的主要区别　　DNA聚合酶I包括大片段(klenow片段)和小片段　　功能上：DNA聚合酶I比klenow酶多了5’→3’核酸外切酶活性，两者都具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性。　　8．影响限制性核酸内切酶活性的主要因素有哪些？　　温度、盐度等物理因素，DNA样品纯度，DNA甲基化程度，限制性核酸内切酶的缓冲液性质，甘油和微量的金属离子会抑制限制性内切酶的活性　　9.如何理解粘性末端比平头末端更容易连接目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受

5、到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　在退火条件下，粘性末端的连接为分子内反应，平头末端是分子间反应，平头末端的连接反应更加复杂，速度也慢。因为一个平头末端的5’磷酸基团或3’羟基与另一个平头末端的3’羟基或5’磷酸基团同时相遇的机会显著减少，通常平头末端的连接速度比粘性末端慢10-100倍。　　11．为什么外源DNA难以转化野生型的微生物受体细胞　　野生型细菌有针对外源DNA的限制和

6、修饰系统，外源DNA会被识别，从而被降解，要选择限制系统缺陷型的受体细胞；外源基因克隆、扩增以及表达是建立在DNA重组分子自主复制的基础上的，受体细胞必须选择体内同源重组缺陷型的受体细胞；用于基因工程的受体细胞必须对重组DNA分子具有较高的可转化性，利用遗传诱变技术改变受体细胞壁的通透性，从而提高其转化率　　13．简述转化子筛选与重组子鉴定的三大基本战略　　载体遗传标记检测：抗药性检测，营养缺陷型检测；显色筛选2+　　克隆DNA序列检测：限制性酶切图谱法，菌落原位杂交法，PCR扩增法　　14．探针、引物、接头的物质基础和用途分别是　　探

7、针:小段单链DNA或RNA,序列可以是已知的或未知的，带有标记，用于检测与其互补的核酸序列；　　引物：小段单链DNA或RNA，序列是已知的，长度为16-30bp，作为DNA复制的起点　　接头：平头双链DNA，更换粘性末端　　15．简述分离克隆目的基因四大战略及其适用范围目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　鸟枪法：将某种生物体的全基因组

8、或单一染色体切成大小适宜的DNA片段，分别连接到载体DNA上，转化受体细胞，形成一套重组克隆，从中筛选出含有目的基因的期望重组子。为保证覆盖整个基因组，需要测远远超过基因组大小的序列；适合较小的基因组；测序