《植物显微技术》word版

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1、华中农业大学植物显微技术院系：园艺林学学院专业：果树学学号：08305110043姓名：谢该生2009年5月湖北武汉华中农业大学基因组原位杂交技术在植物研究中的应用摘要：基因组原位杂交技术作为植物分子细胞遗传学研究的重要手段，以其安全、精确、直观、信息丰富的特点，被广泛地应用于杂种染色体分析，物种的起源、进化和亲缘关系探索，染色体行为考察等方面。文中就基因组原位杂交技术发展过程以及在植物中的应用方面进行阐述，并简述了染色体原位杂交技术最新技术发展，简要讲叙了如何利用原位杂交技术通过细胞检测、染色体检测、基因检测来进行植物研究。关键

2、词：基因组原位杂交，荧光原位杂交，植物，基因组GenomicinsituHybridizationTechnologyandIt’sApplicationinPlantAbstract:Genomicinsituhybridization(GISH)technologyisanimportantmeansinplantmolecularcytogeneticsresearch,withit’scharacteristicofsafety,accuracy,visualizationandrichinformation.Ithasb

3、eenextensivelyappliedinanalysinghybridchromosomeorchromosomefragments,exploringspeciesorigin,evolutionandaffinity,revealingchromosomebehaviorandsoon.ThisisasummaryofGISHtechnologyinplantstudy.Anewdevelopementofchromosomeinsituhybridizationandintroduceshowtodoplantrese

4、archthroughcelldetection,chromosomedetectionandgenedetectionbyuseofinsituhybridizationarepresented．Keywords:Genomicinsituhybridization(GISH);Genome;Chromosome基因组原位杂交是以亲本之一的总基因组DNA做探针，另一亲本的基因组DNA做封阻，在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种染色体/染色质检测技术。1基因组原位杂交技术的发展原位杂交（insituhybridization，

5、ISH），属于固相分子杂交范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织、细胞或染色体上特定的核苷酸序列的一种技术。80年代末发展起来的荧光原位杂交技术(insituhybridization，ISH），属于固相分子杂交范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织、细胞或染色体上特定的核苷酸序列的一种技术。该技术最早时使用放射性元素32P标记的外源核酸片段为探针,与组织、细胞或染色体的特定序列杂交并进行检测。荧光原位杂交技术（fluorescencesituhybridization，FISH）就是在原位杂交技术

6、基础上通过对标记技术的改进而来的。FISH用生物素、地高辛、荧光素等标记物标记探针，将标记的探针与组织、细胞或染色体的DNA、RNA原位杂交，通过荧光免疫反应检测目的DNA或RNA在组织、细胞或染色体上的位置，并通过荧光显微镜直接观察结果。FISH的发展改变了以往用放射性标记做探针的弊端：如实验周期长，对操作人员危害大和废物难处理等，因此广泛的应用于人类医学、动物和植物学的研究中。FISH技术在不断的发展，目前在植物研究中广泛使用的基因组原位杂交技术（genomicinsituhybridization，GISH）就是在荧光原位杂

7、交技术上发展起来的。华中农业大学基因组原位杂交的原理与荧光原位杂交相同，不同的是所用的探针。基因组原位杂交是以来源不同的亲本之一的总基因组DNA做探针，通过生物素、地高辛、荧光素等标记物标记后，再原位杂交到杂种染色体制片上，接着通过与该标记物耦合的荧光素免疫反应，检测该亲本染色体或染色体片段在杂种中的存在状况；而其它亲本的基因组总DNA（或非探针的其它DNA）以一定的浓度比例来封闭杂种染色体上探针的非特异结合位点，尽可能使杂种染色体上的特异位点暴露出来供探针杂交。基因组原位杂交技术分为5个主要步骤：即探针的制备和标记、染色体标本的

8、制备、杂交反应、显色及荧光检测、杂交结果分析。具体的技术路线为：选取适宜做基因组原位杂交的实验材料；对所选的材料进行充分的酶解，以去除细胞壁和细胞质；将酶解后的材料进行染色体制片并从中选取质量好的片子用以杂交实验；同时提取亲本的总基因组DNA，分别