《显微摄影技术》word版

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1、显微摄影技术  显微摄影是一项重要的显微技术，同再现显微镜中物体影象的各种方法比较，显微摄影是最好的方法。它对以显微镜作为研究工具的研究人员是必备的手段，尤其在研究染色体及其分子特征时，就更加显得必要了。现在数码相机的问世，又使显微摄影变得更为简便，且效果好。在有关学术研究和理论探讨时，一帧好的显微照片，可以省去许多的文字描述，并且使人心悦诚服。何况在生物学领域中，确有不少问题的研究，必须借助显微摄影。J[1

2、的显微摄影基本一样，只是省去了底片和暗房技术，由计算机完成。r

3、^z0 @irH>D 一、显微摄影对制片标本的要求]=GF}3a$U 0H+uoU   染色体只见于有丝分裂和减数分裂的细胞核中，根尖、茎端、幼嫩花药和胚珠是镜检染色体的材料，尤以根尖和花药更为常用。观察染色体的形态、结构和数量，常用酶解或压片法制片。此法能保持染色体的完整，并能接近于活体状态。一张好的显微照片，来源于完好的染色体制片标本。适于拍照的制片标本，应具下列条件：w6V12jg 143xK   1、选用标准的载玻片和

4、盖玻片 光源入射光束，经载玻片透射标本，再经盖玻片进入物镜，处于光路之中的玻璃，应是表面无伤，内无气泡；外无霉斑。这样可以杜绝光线乱反射，防止阻光、降低亮度以及有损清晰度。载玻片厚度不宜超出聚光镜的焦距，一般在2毫米以内，可将光源的光束集中于载玻片的标本上。盖玻片的标准厚度为0.17毫米，若使用厚度大于工作距离的盖玻片，物镜前透镜会触及盖玻片，同时不能准焦；盖片厚，球差就大，会降低影象质量。有效盖片厚度，包括封固剂的厚度，即树胶或尤派胶用量，因此，封固剂要调稀，少许滴加一薄层。PEy@s"sg= 'Qba'{   2、染

5、色体处于相宜的时期，平展逸散，完整无损 染色体的计数和组型分析，以有丝分裂的中期(或晚前期)，减数分裂的终变期和粗线期为宜。这时染色体收缩变短，呈典型状态，易识别。通过前处理的精细加工，染色体相互逸散，互不接触，并尽可能使之平展于同一水平面上，又不失细胞的完整轮廊(图3-1)。xSs/gW! hGZf~g?   3、染色鲜明适度 染色体过染，染料堆积，使染色体模糊成一块，难以辨别细节，缺乏质感；染色体着色过浅，使影象不鲜明，辨认不清，反差不大。染色体染色以蓝紫为佳，色彩鲜明，胶片易感受，拍摄效果好。一般多用铁矾苏木精染

6、色制片。当然，醋酸洋红和孚尔根反应也可以。细胞质染色应浅淡，以辨清细胞质的完整轮廓为准。常用铁矾苏木精过染，再用45％醋酸软化和分色，结果染色体着色蓝黑而鲜明，细胞质浅淡而不明显，增大了色彩的对比，扩大了影象的明暗反差。7t)k kXoNy1
   4、清洁无尘，消除气泡 制片中的灰尘异物和气泡，有损影象的质量，防碍观察。气泡为临时制片的常见弊病，小的气泡有碍观瞻；大的气泡连片，推挤染色体，堆积集中，损坏了好的影象。要随时滴加所用的临时封固液，消除气泡。@YvWL6('! EaM#,X3I!V iSa;^jN

7、% 二、选用优质物镜和接目镜A,OmTI0< $,1n).!1   显微摄影是以接物镜和接目镜作为摄影镜头，其中接物镜尤为重要，物镜的分辨率就是显微镜的分辨率。目镜与显微镜的分辨率无关，它只有把物镜已放大的影象进一步放大，既使是最好的目镜，也无法观察到未被物镜分辨的细节。所以摄影时，物镜要严格选择，不可任意滥用。0_;+9I_ e&c,h<
fD 1、物镜 接物镜种类繁多，光学性能相差悬殊。摄影时必须选用得当，绝非任一物镜皆可产生最佳影象。8Jj0M_ tllI('q   物镜由透镜组成。单片透镜具有多种

8、象差，一个完善的物镜，是由一组复杂的透镜组成。按象差矫正程度，物镜可分消色差物镜，复消色差物镜，萤石物镜和平象物镜等类别。UgBaL44J 0S^bpyq*- 消色差物镜，因制造容易，是最常见的物镜。金属外壳上不刻代表(图3-4左)。该物镜将光谱中红光和蓝光聚焦于一点，黄绿光则聚焦于另一点。其最佳清晰范围是在510μm(毫微米)绿光区至630μm橙光区间(图3-2Ach红)。消色差物镜性能较差，不适于显微摄影。因未经矫正的蓝光对感光胶片的乳剂膜非常敏感，全色胶片对未经矫正的红光也能感应。如果必须使用时，加用黄绿色滤色片，也

9、可获得清晰的影象。/d1K!#*7 )m[d.^5   复消色差物镜的性能很高，能将可见光谱中的红、蓝和黄光聚焦于一点，改正了红、蓝色光的球差和其他象差。最佳清晰范围从波长400nm至720nm(图3-2Apo线)，容纳了全部可见光谱。适于任何色光下或加用各色滤色镜摄