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1、对一些DNA提取方法的总结细菌DNA的提取：(-)试剂：1.抽提缓冲液2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)(去色素)lOOmMTris-HCI(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCI2.10MLiCI3.2MLiCI4.DEPC-water(抑制RNA酶活性)5.3MNaAc(pH5.2)6.96%乙醇7.70%乙醇步骤：1.抽提缓冲液65°C预热；2.加菌体到己经预热的缓冲液(700ul)中混匀,659,lOmin：3.加酚/氯仿/异戊醇(25：24：1),振荡，离心12,000rpm.lOmin；4•取上清，加氯仿/异戊醇(24：1)振荡，离心
2、12z000rpm,lOmin；5.取上清，重复4步骤；6.加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇(或加入等体积的界丙醇)，-20C沉淀；11.离心12,000rpm.lOmin；12.弃上淸，70%乙醇洗，也可以再用100%乙醇洗，然后溶解T100ml水中。(二)(我们常用的方法，但是有时有些细菌特别不好提，就用上面的方法)1.将菌株接种于液体LB培养基，37°C震荡培养过夜。2.取1.5ml培养物12000rpm离心2min°3•沉淀物加入567ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮,加入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K,混匀，于37°C温育lh・4.加入1
3、OOul5mol/LNaCI,充分混匀，再加入80ulCTAB/NaCI溶液,混匀后再65°C温育lOmin。5.加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min,将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混介直到DNA沉淀下來，沉淀可稍加离心。6.沉淀用lml的70%乙醉洗涤后，离心弃乙醉.真菌DNA的提取：(一)1.取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研弊成粉2.加入4mL提取液，快速振荡混匀3.加入等体积的4mL的氯仿:异戊醉(24:1),涡旋3〜5min(此处是粗提没冇加酚，可以节约成本的哟！)4.1000rpm,4°C,5min5.上清用体积的氯仿:异戊
4、醇(24:1)再抽提-•次(10,000rpm,4°C离心5min)6.取上清，加入2/3倍体积的・2(TC预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀，混匀，静置约30minulTE>
5、«R7.用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂洗1次，吹干,重悬于5008•加入1ulRNaseA(10mg/mL),37°C处理lhr9•用酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4°C离心5min)10•取上清,1/10V3MNaAcz2.5V体积的无水乙醇厂70T沉淀30min以上11・沉淀用75%乙醇漂
6、洗，风干，溶于200UITE中，-20°C保存备用DNA提取液:0.2MTris-HCI(pH7.5),0.5MNaCL0.01MEDTA,1%SDS,3MNaAc(二)1.真菌菌丝0.5・lgz在液氮屮迅速研M成粉2.加入3mL65°C预热的DNA提収缓冲液，快速振荡混匀65°C水浴30min,期间混匀2-3次3.加入1mL5MKAc，冰浴20min4.等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4°C离心5min)5.取上清，加入2/3倍体积的・20°C预冷异丙醇，混匀，静置约30minLp6.用毛细玻棒挑出絮状沉淀，用75%乙醇反复漂洗数次，再用无水乙醇漂
7、洗1次，吹干，雨悬于500TE中5.加入luIRNaseA(10mg/mL),37°C处理1hr6.用酚(pH8.0):氯仿:界戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次(10,000rpm,4°C离心5min)7.取上清,1/10V3MNaAc,2.5V体积的无水乙醇z-70eC沉淀30min以上8.沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，・20°C保存备用。以上是我们常用的方法.抗凝血DNA的提取方法1.分离外丿对血白细胞(1)取患者肘静脉血5ml,EDTA抗凝，2500rpm离心10min。(2)小心吸取上层血浆,分装到3个0.5ml离心管中。(3
8、)在血细胞中加入3倍体积的溶血液，摇匀,冰浴15min。(4)2500rpm离心10min,弃上清。(5)加入10ml溶血液，摇匀，冰浴15min。Bfr3000rpm离心10min,弃上清。(7)倒置离心管，去掉残液。J得口细胞，一80OC冻存。2.从口细胞中提取基因组DNA(1)取口细胞，加4.5mlSE,使劲吹打，混匀。(2)沿管壁加入0.5ml的10%SDS。⑶加蛋白酶E50pl/管。(4)首尾轻摇10min,混匀。(5)37OC水浴过夜。眇第二夭取出，沿管壁加3ml饱和
