实验七绞股蓝总皂苷的提取分离和鉴别

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1、实验七绞股蓝总皂昔的提取分离和鉴别（设计性实验）绞股蓝为葫芦科植物Gynostcmmapcntaphyllum（Thunb.）「•燥全草，乂名七叶胆。从绞股蓝中分得皂昔已达80余种，其中七种与人参皂昔完全相同，故绞股蓝又有“南方人参”的美誉。绞股蓝总皂背是绞股蓝全草中有效成分，貝-有降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗衰老、保护肝脏及增强机休免疫功能等作丿IJ。主要药理实验证明绞股蓝总皂甘对肿瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用。对人体有滋补、镇静、催眠、促食欲、降血脂、降胆固醇、降转氨酶、延缓衰老等作用。一、实验目的：

2、1。掌握D-101人孔吸附树脂分离纯化绞股蓝总皂计的原理和实验操作方法；2。掌握查阅文献资料的方法和思路3。熟悉皂昔类成分的性质及鉴别方法二、仪器与试药：（一）仪器D-101人孔吸附树脂玻璃层析柱（2.0X50）圆底烧瓶（1000ml）试管SHB・循环水式多用真空泵HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器ZF・2型三用紫外仪电热恒温干燥箱烧杯空气I叫流管移液管（10ml、5ml）锥形瓶（100ml）硅胶G（薄层层析用）滤纸研体球形冷凝管蒸发皿（二）试药绞股蓝药材95%乙醇蒸憎水盐酸氢氧化钠冰醋酸醋酊浓硫酸

3、a—蔡酚试剂人参皂昔Rbl对照品乙醇液正丁醇乙酸乙酯喷5%磷钳酸乙醇液活性炭三、实验原理：绞股蓝总皂普有较好的水溶性，町用水为提取溶剂，因为绞股蓝皂计分子中含有非极性部分三砧母核，故町使其在非极性大孔树脂上能较好地被吸附，相反，极性较大的成分如糖类则在非极性大孔树脂上难以吸附，因而选川非极性大孔吸附树脂D101型可将绞股蓝水提物屮的总皂普与糖类等水溶性成分较好地分离，最后用活性炭脱色，从而达到纯化的目的。大孔吸附树脂颜色：白色、乳白色至微黄物理化学性质稳定，不溶于任何酸、碱及有机溶剂，加热不溶，可在150

4、°C以下使用含水量：60〜80%堆积密度：0.6〜0.9适用的新药类型：1•中药冇效成分的粗分和精制2.单味中药有效部位的制备3•中药复方有效部位的制备注意：①性质相似成分可混煎后一•起制备②各味药所含成分性质差别较大的复方应单独提取后，再制备③单味药有效成分性质差别较大的应分别制备四、实验内容:水浴冋流过滤绞股蓝粗粉15g+95%乙醇150ml滤液残渣1）提取水浴回流30min,过滤、残渣+95%乙醇100ml合并两次滤液减压回收乙醇至5〜10〃〃、＞浓缩物。和*据相关文献记载，在绞股蓝皂昔的提取过程屮

5、，不同的提収条件对绞股蓝皂昔的提取率令很人影响，提取温度和浸提次数的影响明显人于乙醇浓度和料液比，英影响依次是浸提次数、浸泡温度、乙醇浓度、料液比。最伴提取工艺为：1:12的料液比加入浓度为70%的乙醇溶液，在40°下浸泡，共浸提6d,浸提3次，即每2d浸提1次。（绞股蓝电卄最隹提取条件的研究：沈宏伟、肖彦春、车仁国等）2）分离2ml/min,、2%MzOH洗涤,5"〃/min、绞股蓝提取液过犬孔吸附树脂柱%»95%乙醇洗脱、流出液接近无色时，改用水洗，至流出液pH接近7为止收集醇洗脱液至无绞股蓝电背洗出

6、。醇洗脱液少量活性炭，冋流lOmin,趁热过滤》滤液回收乙醇至小体积少量活性炭，冋流lOmin,趁热过滤、得白色鳞片状结品，为绞股蓝总皂芹。大孔吸附树脂回收。3）鉴别1.呈色反应（1）酷酹-•浓硫酸反应収绞股蓝总皂芹少许，置蒸发皿中，滴加冰酷酸lml溶解,再加1FB1醋肝，然后于溶液边沿滴加浓硫酸，观察颜色变化。（2）molish反应取绞股蓝总皂廿少许于试管中，加乙醇lml溶解，滴加lmla—酚试剂，然后沿试管壁加入2ml硫酸，不要摇动，观察两液交界血的颜色。2.薄层色谱鉴別薄层板：硅胶H—CMC-Na板

7、。点样：纯化的绞股蓝皂昔乙醇液、人参皂莒Rbl対照品乙醇液。展开剂：正丁醇■乙酸乙酯■水（4：1：5,上层）。展开方式：上行展开。显色：喷5%磷钳酸乙醇液110°C加热显色（约5min）；或喷硫酸■甲醇（1：1）溶液,105°C加热显色。观察记录：显色前后置日光及紫外光灯（365nm）下检视，观察斑点颜色及位置，记录图谱。五、实验结果：1。详细记录实验内容。2o详细记录定性鉴别结果，并绘制色谱图，计算Rf值。3。总结实验过程中遇到的问题和解决方法。①绞股蓝提取液用碱液调至pH9〜10后，应放置适当时间，便

8、丁析出的粒子聚集以利过滤。在碱性条件下，绞股蓝皂百能较好地吸附于树脂上而其它杂质成分形成离子型化合物随溶液流出，利于纯化。②上样速度不宜过快。过快影响树脂与溶质间的吸附交换平衡，导致吸附容量下降。③皂昔经树脂吸附示，洗除在树脂表而或内部残留的杂质时，用碱液效果较水洗为好。因为碱液改受了杂质的极性，从而改变了杂质被吸附的能力。④洗脱液含有少量的有色物质，可通过活性炭脱色除去。活性炭的用量不宜过多，以免造成皂背的损失，本实验以0.