小麦抗感纹枯病品种酶活性比较研究

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1、小麦抗感纹枯病品种酶活性比较研究路兴波（山东省农业科学院植物保护研究所济南250100）吴洵耻周凯南（山东农业大学植物保护系泰安271018）摘要木试验选择了4个对纹枯病抗性不同的小麦品种，对它们的过氧化物酶活性、多酚氧化輛活性与抗病性关系进行了研究。结果表明：抗病品种的多酚氧化酶活性高于感病品种的,而过氧化物酶活性无显著差异；人工接种后，各品种的酶活性均增高，但抗病品种的酶活性增加的速度和峰值均人于感病品种。关键词小麦纹枯病过氧化物酶多酚氧化猶大量的研究报道表明，小麦品种对纹枯病抗性存在明显差

2、弄，但关于抗性机制的研究报道I筍未发现。过氧化物酶和多酚氧化酶在植物抗病屮的作用已被广泛研究，但对它们在受侵染植株中的变化特点和与抗性的关系有不同的观点。有人认为寄主植物受到病原物侵染后，在抗病组合中两酶的活性升高得快，比感病组合高出若干倍，由此认为它们参与和决定植物的抗性。而另冇人认为感病植物的过氧化物酶活性增加得高月•快，故认为它们的增加与抗病性无关，它可能为症状表现的反应［1〜9］。关于过氧化物酶同工酶的变化规律也有不同的报道,有报道认为新酶带出现在感病品种上，也有人报道认为新酶带出现在抗

3、病品种上，而更有一些报道认为没冇新的酶带出现［3,4,&10］。1材料和方法1.1试验材料1.1.1供试品种选用4个不同抗性品种：昌乐5号、运辐早（高抗品种，病指为4.4和5.0）,济南13（易感病品种,病指为42.5）,鲁麦14仲等感病品种,病指为22.5）。1.1.2菌种与取样方法小麦纹枯病菌Rhizoctoniacerealis强致病菌株（泰安）在玉米砂培养基上培养，23°C恒温培养14天，待用。沙培小麦，于幼苗三叶期接种，直接把玉米砂培菌撒在幼苗茎基部保湿，于接种前1天，接种后2天、8天

4、、12天分别取样，供试验用。1.2试验方法121过氧化物酶活性测定称取小麦茎基部鲜重比，加5mlTris-HCI缓冲液(pH8.5)于研钵中研磨成匀浆，4000pm离心15分钟，倾出上清液，必耍吋残渣用5ml缓冲液提取一次，合并上清液，贮于低温冰箱(0〜5°C)备用。取光径lcm比色杯2只，于1只屮加入上述酶液l()u1,再加入反应液3ml(反应液:().2M磷酸缓冲液(pH6.0)50ml,过氧化氢0.028ml，愈创木酚0.019ml混合而成)立即开卅秒表记录时间，于另一比色杯中加入0.2M

5、H3PO4缓冲液(pH6.0),作为校零对照，在分光光度计上测定反应30秒时在波长470nm下的光密度值。以每分钟光密度值变化表示酶的活性大小，用以D470nm下，1分钟•毫克蛋白(或克•鲜巫)表示。1.2.2多酚氧化酶(PPO)的活性测定称小麦茎基部鲜重lg,加蒸谓水少许，于研钵中研细，转移到50ml容量瓶屮，混匀。得到的溶液进行振荡，勿使沉淀下沉，吸取10ml悬浮液，倒入250ml滴定瓶中。加入pH6.4的磷酸缓冲液，再加5ml0.4N的抗坏血酸溶液,混匀,加入5ml0.2%的邻苯二酚溶液，

6、同时开始计时，并振荡溶液。均匀振荡2分钟，以使空气中氧气充分进入溶液中。精确经过2分钟后，加入5ml5%偏磷酸终止反应(实验在20°C水浴锅中进行)。在有lml0.5%淀粉溶液存在下，用0.01N碘酸钾溶液滴定抗坏血酸的剩余物，直到蓝色不消失为止，同时进行对照滴定。根据所测数据按下式计算多酚氧化酶活性：A==式屮：A为多酚氧化酶活性(lg材料2()°C下1分钟氧化抗坏血酸的微克分了数)；50为分析物悬浮液的总体积；n为分析物样品重量;10为测定腮活性所取的悬浮液体积(ml)；2为反应进行时间(分

7、)；a为川丁•对照滴定的0.0IN'I'KIO3溶液体积(ml)；b为用于样品滴定的0.01NKI03溶液体积（ml）；5为0.0IN抗坏血酸溶液的毫克换算为微克的系数（=5）。2结果与分析2.1过氧化物卿活性测定表14个品种过氧化物酶活性测定结果（克•鲜重）品种未接种接种2天接种8天接种12天昌乐5号0.571」0(93.0%)1.35(136.8%)0.94(64.9%)运辐早0.631.12(77.8%)1.45(130.2%)0.95(50.8%)鲁麦14号0.580.75(29.3%)

8、1.13(94.8%)1.05(81.0%)济南130.410.55(34.1%)0.82(100%)0.77(87.8%)注：()内数值为接种后增加的百分比。根据4个品种不同接种时期过氧化物酶活性测定结果表明：未接种时各品种Z间过氧化物酶的活性差显较小，接种后，各品种过氧化物廨活性都增加，抗病品种吕乐5号和运辐早组织中的过氧化物酶活性接种2天后迅速增加，分别增加93%和78%；接种8天后达到高峰，分别增加137%和130%；然后两品种组织中的过氧化物酶的活性F降很快,到第12天时已下降到接种后