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1、免疫磁珠法分离并鉴定前列腺癌类干细胞[基金项目]教育部新教师基金项目（No.200804871051），湖北省卫生厅青年人才基金（QJX2010－5）[第一作者]秦亮，电话：13476248595，E-mail:ql_198572@163.com（稿件相关事宜烦请与第一作者联系）[通信作者]廖晖，E-mail:liaohui@tjh.tjmu.edu.cn秦亮，陈安民，郭风劲，卞峰，杜宇，姚斌，廖晖（430030湖北武汉，华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科）[摘要]目的利用免疫磁珠法分选并鉴定人前列腺癌类干细胞。方法利用免疫磁
2、珠法从人前列腺癌细胞株PC-3中分选出CD133+/CD44+细胞，通过免疫组化、流式细胞术、CCK8法、平板克隆形成实验以及体外裸鼠移植瘤实验鉴定其表面标志物表达情况及其肿瘤干细胞特性。结果经免疫磁珠分选所得CD133+/CD44+细胞数比例为0.50%；免疫组化结果显示其CD44/CD133/integinα2β1均呈高表达；流式细胞分析显示其CD44/CD133双阳性率达52.28%，其同时表达integinα2β1阳性的细胞比例为59.16%；其细胞增殖率和克隆形成率高于PC-3细胞；以低密度（1×103）皮下注射时，其裸
3、鼠体内成瘤率明显高于PC-3细胞。结论利用免疫磁珠分选法可以从人前列腺癌细胞株PC-3中高效的分选出具有肿瘤干细胞生物学特性的前列腺癌类干细胞。[关键词]肿瘤干细胞；前列腺癌；免疫磁珠分选Theisolationandidentificationoftheprostatecancerstemcellsbymagneticactivecellsorting.QinLiang,ChenAn-min,GuoFengjing,BianFeng,DuYu,YaoBin,LiaoHui.(DepartmentofOrthopedics,Ton
4、gjiHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,China)[ABSTRACT]ObjectiveToisolate,cultureandidentifytheprostatecancerstemcells(CSCs)bymagneticactivecellsorting(MACS).MethodsCD133+/CD44+cellswereselectedfromPC-3humanprostaticcarci
5、nomacellslinesbyMACS,andtheywereidentifiedasprostatecancerstem-likecellsbyimmunohistochemistry,flow-cytometricanalysis,CCK8,colony-formingassayandtumorigenicityassayinvivo.ResultsCD133+/CD44+cellsselectedfromPC-3celllinesbyMACSshowedthattheproportionofCD133+/CD44+cell
6、swas52.28%,andtheproportionofinteginα2β1+cellswas59.16%byflow-cytometricanalysis;theselectedcells'proliferatingpotentialandclony-formingratewerehigherthanPC-3celllinesinvitro;andtheirtumorigenicityrateweresignificantlyhigherthanPC-3celllinesinvivowhenseededatalowdensi
7、ty(1×103).ConclusionMACSwasasimpleandeffectivemethodtogainprostaticcarcinomastemcellsfromPC-3humanprostaticcarcinomacelllines.[Keywords]Cancerstemcells;Prostatecancer;MagneticactivecellsortingCorrespondingauthor:LiaoHui,E-mail:liaohui@tjh.tjmu.edu.cn随着前列腺癌发病率的逐年增高，且多以
8、骨转移为首发症状，故有关前列腺癌骨转移方面的研究成为近来国内外研究的热点。近年来有研究表明，恶性肿瘤可能起源于肿瘤干细胞（cancerstemcell,CSCs），具有自我更新、无限增殖、多向分化潜能等干细胞特性[1,2]。Ponti及Singh等
