硕士论文——五龙鹅MHCⅠ基因克隆、组织表达及分子特性的研究

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1、硕士学位论文五龙鹅MHCⅠ基因克隆、组织表达及分子特性的研究目录中文摘要…………………………………………………………………………………………………ⅰ英文摘要…………………………………………………………………………………………………ⅲ缩略符号…………………………………………………………………………………………………ⅴ文献综述11综述前言12MHCⅠ分子结构与作用机理23畜禽MHC的研究概况44MHC与畜禽抗病性关系的研究6研究内容1五龙鹅MHCclassⅠcDNA基因克隆及序列分析91.1试验材料和方法91.1.1实验动物91.1.2质粒和菌株91.1.

2、3主要工具酶及试剂91.1.4试验仪器101.1.5所用溶液及其配制111.1.6五龙鹅MHCclassⅠcDNA基因的扩增和测序131.2结果与分析181.2.1五龙鹅脾脏TotalRNA181.2.2五龙鹅MHCclassⅠcDNA基因扩增181.2.3扩增条件的优化181.2.4插入片段的转化181.2.5插入片段的检测191.2.6重组质粒的序列测定201.2.7测序结果201.3讨论212五龙鹅MHCclassⅠ基因组DNA克隆及序列分析232.1试验材料和方法：232.1.1试验材料232.1.2试验方法232.2试验结果分析242.2.1

3、五龙鹅MHCclassⅠ基因组基因的PCR扩增与鉴定242.2.2重组质粒的鉴定252.2.3重组质粒测序结果252.2.4五龙鹅MHCclassⅠ基因组基因测序结果分析252.3讨论263利用Realtime-PCR对鹅MHCclassI基因的检测283.1试验材料和方法283.1.1试验材料283.1.2质粒和菌株283.1.3主要工具酶及试剂283.1.4主要仪器293.1.5试验方法303.1.6五龙鹅MHCclassI基因逆转录303.1.7五龙鹅MHCclassI基因片段的回收313.1.8重组质粒的构建313.1.9Realtine-PC

4、R对表达量的检测313.2试验结果分析333.2.1目的基因的PCR扩增检测333.2.2目的基因的标准曲线的制备343.2.3目的基因的Realtine-PCR353.3讨论364鹅MHCclassI基因的分子特性的分析394.1材料与方法394.1.1试验序列394.1.2序列的提交394.1.3核酸序列的基本分析404.1.4鹅MHCclassI蛋白质一级序列的基本分析404.1.5鹅MHCclassI蛋白质二级结构和功能预测404.1.6鹅MHCclassI蛋白质三级结构预测424.1.7同源性分析与系统发育分析424.2试验结果与分析434.

5、2.1核酸序列基本分析434.2.2蛋白质一级序列的基本分析444.2.3鹅MHCclassI蛋白二级结构和功能预测454.2.4鹅MHCclassI蛋白三级结构和功能预测494.2.5同源性分析504.3讨论51结论52参考文献53附录58致谢69ContentsAbstract…………………………………………………………………………………………………ⅰEnglishabstract…………………………………………………………………………………………ⅲAbbreviationKey………………………………………………………………………………………ⅴT

6、extSummary11SummaryPreface12MolecularStructureandmechanismofactionofMHCⅠ23GeneralsituationofMHCinlivestockandpoultry44ResearchoftheDiseaseResistantofMHCwithlivestockandpoultry61CloningandSequenceDetermineofMHCclassⅠcDNAinWulonggoose1.1Materialsandmethods91.1.1Experimentalanimal9

7、1.1.2VecterandBacterialstrain91.1.3Toolenzymeandreagent91.1.4Experimentalinstrument101.1.5Solutionandthedispensemethod111.1.6AmplifiedandsequencedetermineofMHCclassⅠcDNAinWulonggoose131.2Resultsandanalysis181.2.1ThetotalRNAofspleeninWulonggoose181.2.2AmplifiedofMHCclassⅠcDNAofWu

8、longgoose181.2.3Optimizevoftheamplifiedconditio