大鼠脾脏来源内皮祖细胞对c6胶质瘤细胞增殖能力影响的体外研究

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1、大鼠脾脏来源内皮祖细胞对C6胶质瘤细胞增殖能力影响的体外研究方靖琴，张伟国，马长锁（400042重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所放射科）[摘要]目的研究体外内皮祖细胞对C6胶质瘤细胞增殖能力的影响。方法取SD大鼠脾脏采用密度梯度离心法获取内皮祖细胞，通过分化过程中的形态特征、内皮祖细胞吞噬乙酰化低密度酯蛋白和结合荆豆凝集素-1的特异性和免疫荧光检测细胞表面抗原CD34和CD31的表达进行鉴定。将内皮祖细胞条件培养基加至C6胶质瘤细胞的常规培养基中观测其对C6胶质瘤细胞增殖的影响；分别采用内皮祖细胞条件培养基和常规培养基孵育C6胶质瘤细胞24h，流式细胞仪检

2、测2组的细胞周期。结果激光共聚焦鉴定DiI-acLDL和FITC-UEA-1双染色阳性细胞即为正在分化的内皮祖细胞；免疫荧光检测内皮祖细胞一致性表达CD34和CD31。随着内皮祖细胞条件培养基含量的增加，2个检测时间点各组的吸光值也随着增加，且50%内皮祖细胞条件培养基组D（490）值(2.018±0.220)、(2.388±0.448)均高于对照组(1.163±0.103)、(1.106±0.174)，且差别有统计学意义(P＜0.01)；50%含有内皮祖细胞条件培养基培养的C6胶质瘤细胞的增殖率即S+G2/M明显高于对照组(P＜0.05)。结论体外内皮祖细胞条件

3、培养基能促进C6胶质瘤细胞的增殖，其机制可能与其分泌的各种血管生成类细胞因子有关。[关键词]内皮祖细胞；C6胶质瘤细胞；增殖；体外[中图法分类号][文献标志码]AEffectofendothelialprogenitorcellsontheproliferationofC6gliomacellsunderco-culturesysteminvitroFangJingqin,ZhangWeiguo,MaChangsuo(DepartmentofRadiology,InstituteofSurgeryResearch,DapingHospital,ThirdMilit

4、aryMedicalUniversaty,Chongqing,400042,China)[Abstract]ObjectiveStudytheeffectofendothelialprogenitorcellsonthegrowthofC6gliomacellsinvitro.MethodsTheendothelialprogenitorcells(EPCs)wereobtainedfromthespinofhealthySDratswithcombineddensitygradientcentrifugalizationwithadherencescreenin

5、gmethod.TheEPCswerecharacterizationthroughmorphologiccharacteristics,specificforDiI-acLDLuptakingandLectinbindingandtheexpressionofCD34,CD31detectedbyimmunofluorescence.CombinetheendothelialprogenitorcellsconditionalmediumwithconventionmediumtoassessitseffectontheproliferationofC6glio

6、macellsAftercultured24hbytheendothelialprogenitorcellsconditionalmediumandconventionalmediumrespectively,flowcytometrydetectedthecellcycle.ResultsAfter10dayscultured,theattachedcellswereabletopresent“line-like”structure,theadherentcellsweredoublepositiveforDiI-acLDLuptakingandFITC-UEA

7、-1bindingbydirectflourescentstainingunderalaserscanningconfocalmicroscopeweredifferentiatedendothelialprogenitorcells;thecellswhollyexpressedCD34andCD31.ThetwodetectiontimeoftheODvalueofeveryeachgroupwerealsoincreasedasthecontentofprogenitorcell-conditionedmediumincreased.TheODvalueof

8、thegr