雷帕霉素诱导细胞自噬促进乙型肝炎病毒的复制

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1、雷帕霉素诱导细胞自噬促进乙型肝炎病毒的复制李霞，黄文娟，朱素菲，陈维贤（400010重庆，重庆医科大学附属第二医院检验科）[摘要]目的研究雷帕霉素诱导细胞产生自噬对乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV)复制的影响。方法通过雷帕霉素诱导人肝癌细胞HepG22.15产生自噬，荧光显微镜和透射电镜下观察自噬小体形成，Westernblot检测诱导后HepG22.15细胞自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I的表达水平；荧光定量PCR检测HBVmRNA水平；加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA），Westernblot检测自噬抑制后LC3-II/LC3-I的表达水

2、平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的表达，Southernblot检测HBVDNA水平，验证HBV复制情况。结果雷帕霉素诱导后，HepG22.15细胞在荧光显微镜和透射电镜下观察到自噬小体的形成，LC3-II/LC3-I比值显著上升（P<0.05）；细胞诱导自噬后HBsAg和HBVmRNA显著增加（P<0.05），而加入自噬抑制剂3-MA后，HBsAg和HBVDNA均显著减少（P<0.05）。结论雷帕霉素可能通过诱导细胞自噬促进HBV的复制。[关键词]雷帕霉素；自噬；乙型肝炎病毒；复制[中图分类号]R373.2+1；R512.6[文献标志

3、码]ARapamycininducedautophagyandpromotesHBVreplicationLiXia,HuangWenjuan,ZhuSufei,ChenWeixian(TheDepartmentofLaboratoryMedicine,theSecondAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing,400010,China)[Abstract]ObjectiveTostudytheeffectofautophagyinducedbyRapamycinonHBVreplication.Me

4、thodsHepG22.15cellsweretreatedwithRapamycintoinduceautophagy,fluorescencemicroscopeandtransmissionelectronmicroscopy(SEM)wereusedtoobservetheautophagosomes,westernblotwasperformedtoanalysistheexpressionlevelofautophagymarkerproteinLC3-II/LC3-I;fluorescencequantitativeRT-PCRwasusedtodetect

5、thehepatitisBvirusmRNAlevels.Then,jointheautophagyinhibitor3-methyladenine(3-MA),westernblotwasemployedtodetecttheexpressionlevelofLC3-II/LC3-Iafterautophagyinhibited,Enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)wasusedtodetecttheexpressionofhepatitisBvirussurfaceantigen(HBsAg),thelevelofHBVDNAw

6、asevaluatedbySouthernblot.ResultsAutophagosomeswereobservedinHepG22.15cellstreatedwithRapamycinunderthefluorescencemicroscopeandtransmissionelectronmicroscopy,theexpressionlevelofLC3-II/LC3-Iwassignificantlyincreased(P<0.05).TheexpressionofHBsAgandHBVmRNAincreasedsignificantly(P<0.05)afte

7、rinductionofautophagy,andtheexpressionofHBsAgandHBVDNAweresignificantlyreduced(P<0.05)afterjoinedautophagyinhibitor3-MA.ConclusionsRapamycinmaypromotethereplicationoftheHBVbyinducingcellautophagy.[Keywords]Rapamycin;Autophagy;HepatitisBvirus；replicationSupportedbyth