应用rnai技术沉默survivin基因对肾癌786-o细胞的影响

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1、应用RNAi技术沉默survivin基因对肾癌786-O细胞的影响　　　　　　　　　　　　　　　李戈，王明（重庆医科大学附属第一医院泌尿外科，重庆　４０００１６）【摘要】目的：运用RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术特异性阻断肾癌786-O细胞系中survivin基因的表达，并研究survivin沉默后对786-O细胞的影响。方法：用真核转录载体pcDNA™6.2-GW/EmGFPmiR构建针对survivin基因的干扰载体，用脂质体法转染肾癌786-O细胞，通过RT-PCR、免

2、疫组化分别检测survivin基因的mRNA和蛋白水平的表达，MTT法检测细胞生长的影响。结果：干扰载体有效的阻断了786-O细胞中survivin基因在mRNA与蛋白水平上的表达，细胞活性受到抑制。结论：RNAi技术沉默survivin基因可以下调肾癌786-O细胞survivin基因的表达，抑制细胞的活性，为以survivin基因为靶点的肾癌基因治疗研究提供了实验依据。【关键词】　RNA干扰；survivin；肾癌；基因治疗【中图分类号】R737.1【文献标识码】AInhibitionofhuma

3、nrenalcancercellline786-ObysilencingsurvivingenewithRNAiLIGe,WANGMingDepartmentofUrinarySurgery,theFirstAffiliatedHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China【Abstract】Objective：ToobservetheinhibitoryeffectsofRNAisuppressingtheexpressionofs

4、urvivinandinducingtheapoptosisofhumanrenalcancercellline786-O．Methods：ThetargetgenefragmentswereclonedintopcDNA™6.2-GW/EmGFPmiRvectors，andthentherecombinanteukaryoticexpressionvectorsweretransfectedinto786-Ocellswithliposomes．Theexpressionchangesinsurvi

5、vinmRNAandproteinweredetectedbyRT-PCRandimmunohistochemisty，theproliferationinhibitoryrate(IR)of786-OcellswasdetectedbyM'TT．Results：ThemRNAandproteinexpressionsofsurvivingeneinthesiRNAgroupweresignificantlyinhibitedbytheeukaryoticexpressionvectors，andit

6、alsoinhibitsignificantlythegrowthandproliferationof786-Ocells．Conclusion：SilencingsurvivingenebytheRNAitechniquecannotonlydecreaseeffectivelytheexpressionsofsurvivingeneandprotein，butalsoinhibitthecellproliferationin786-Ocells．Thismayprovidetheexperimen

7、talevidenceforthesurvivingeneasatargetofgenetherapyinrenalcancer．【Keywords】RNAinterference；Survivin；Renalcancer；Genetherapy肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，但由于绝大多数肾癌为先天多药耐药，除早期肾癌通过手术治疗效果较好外，大多数中晚期肾癌缺乏有效的治疗方法[1]，故探明一种对肾透明细胞癌切实有效的治疗方法就显得尤为重要。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是近年来

8、发现的一项的可以快速、高效地降解体内特定基因的mRNA，使特定基因沉默的技术，它的出现为肿瘤的基因治疗开辟了一个更广阔的领域。Survivin是新近发现的凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein，IAP)家族中作用最强的凋亡抑制因子，在大多数恶性肿瘤中高表达，不见于正常成熟组织中，它不仅能抑制细胞凋亡，还具有促进细胞增殖的作用。因此，鉴于它的特性使其有望成为理想的肿瘤基因治疗靶点。本研究通过设计合成针对survivin基因的特