吐根碱对肾癌786-o细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

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1、分类号：密级：UDC：学号：416523212129南昌大学专业学位研究生学位论文吐根碱对肾癌786-O细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨Effectsofemetineonproliferationandapoptosisofrenalcellcarcinoma786-Ocellsanditsmechanisms苏宏领培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：孙庭教授主任医师专业学位种类：临床医学专业领域名称：外科学（泌尿外）论文答辩日期：2015年6月答辩委员会主席：史子敏评阅人：王晓荣袁铿2015年6月2日学

2、位论文独创性声明一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版

3、，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向

4、校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：本研究观察吐根碱（emetine）对人肾癌786-O细胞株增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机制，为吐根碱应用于肾癌的临床研究提供理论依据。方法：1、体外培养肾癌786-O细胞株，选取对数生长期细胞，实验组加入不同浓度梯度的吐根碱分别干预24h、48h及72h，并设细胞对照组（仅加培养基），溶媒对照组（加0.16‰DMSO）。用MTT（噻唑蓝）检测药物对细胞增殖活性的影响。2、采用流式细胞仪检测786-O细胞的凋亡率。3、采用RT-PCR检测786-O细胞内PI3K和AktmR

5、NA的相对表达量。4、采用Western-blot测定786-O细胞内总Akt和p-Akt蛋白的相对表达量。结果：1、吐根碱对肾癌786-O细胞增殖有显著的抑制作用，25nM以上随药物浓度的增大、作用时间的延长，抑制作用随之增强，且呈剂量-时间依赖性(P＜0.01)。2、实验组细胞的凋亡率与对照组相比明显升高，差异具有显著统计学意义（P＜0.01）,且随吐根碱剂量的增大而升高。3、实验组细胞内PI3KmRNA的表达水平与对照组相比明显减少（P＜0.01），且随吐根碱剂量的升高而减少。但AktmRNA的表达水平无明显变化。差异无统计

6、学意义（P＞0.05）。4、实验组细胞内p-Akt蛋白的表达水平与对照组相比明显减少（P＜0.01），且随吐根碱剂量的升高而减少。但总Akt蛋白的表达水平无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。II摘要结论：1、吐根碱在体外可以抑制肾癌786-O细胞的增殖，且呈剂量-时间依赖性。2、吐根碱在体外可以诱导肾癌786-O细胞凋亡。3、吐根碱可以下调PI3KmRNA和p-Akt蛋白的表达水平，但对AktmRNA和总Akt蛋白的表达水平无明显影响。4、抑制PI3K-Akt信号通路活性，可能是吐根碱发挥抗肾癌作用的重要机制。关键词：吐

7、根碱；肾癌；PI3K-Akt信号通路；增殖；凋亡IIIAbstractABSTRACTObjectives:Toinvestigatetheeffectofemetineonproliferationandapoptosisinhumanrenalcarcinoma786-0cellsandthemechanisminvolved,andtoprovideatheoreticalbasisforemetineappliedintheclinicalresearchofrenalcellcarcinoma.Methods:1.Ren

8、alcellcarcinoma786-Ocellswereculturedinvitro.Weselectedthelogarithmicgrowthphasecells.Then,experimentalgroupsweretreatedwith