《DB51T660-2007-猪肉中己烯雌酚残留检测方法－酶联免疫吸附测定(ELISA)法》.doc

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1、NY××××—××××DB四川省质量技术监督局发布2007-05-01实施2007-03-17发布猪肉中己烯雌酚残留检测方法－酶联免疫吸附测定(ELISA)法DeterminationofDiethylstilbestrolResiduesinMuscleofPigbyEnzyme-linkedImmunosorbentAssayDB51/T660—2007四川省地方标准ICS：65.020.30备案号：1DB51/T660—2007目次前言II1范围12规范性引用文件13制样13.1样品的制备13.2样品的保存14测定方法14.1方法提要或原理14.2试剂和材料14.

2、3仪器和设备24.4测定步骤24.5结果计算和表述25检测方法灵敏度、准确度、精密度35.1灵敏度35.2准确度35.3精密度3IDB51/T660—2007前言本标准按GB/T1.1—2000《标准的结构和编写规则》进行编制本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所本标准主要起草人：程江、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艳丽、王海波、吴晓岚IDB51/T660—2007猪肉中己烯雌酚残留检测方法－酶联免疫吸附测定(ELISA)法1　范围本标准规定了猪肉中己烯雌酚残留量检测的制样和酶联免疫吸附测定

3、法。本标准适用于猪肉中己烯雌酚的残留量的快速筛选检测。对于可疑样品需用确证法确认。2　规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T1.1-2000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则(ISO/IECDirectives,Part3,1997,RulesforthestructureanddraftingofInternationalS

4、tandards,NEQ)GB/T6682-1992分析实验室用水规则和试验方法农牧发[2003]1号兽药残留试验技术规范（试行）3　制样3.1　样品的制备取适量新鲜或冷冻的空白或供试猪肉组织，绞碎并之使均匀，密封。3.2　样品的保存-20℃以下冰箱中贮存备用。4　测定方法4.1　方法提要或原理猪肉中残留的己烯雌酚用叔丁基甲基醚提取，酶联免疫吸附测定法测定,其基本原理是抗原抗体反应。酶标板的微孔包被有偶联抗原，标样或样品中的己烯雌酚与微孔中预包被的偶联抗原竞争己烯雌酚特抗体。通过洗涤除去没有与特异性抗体结合的酶标记抗原。加入底物液，结合到板上的酶标记物将底物转化为有色产

5、物。加入终止液，在450nm处测定吸光度值，吸光度值与试样中己烯雌酚浓度呈反比。4.2　试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2.1　叔丁基甲基醚4.2.2　乙腈4.2.3　正己烷4.2.4　己烯雌酚试剂盒（采用官方备案的试剂盒）4.2.6.1己烯雌酚系列标准溶液0ng/mL、0.1ng/mL、0.3ng/mL、0.9ng/mL、2.7ng/mL、8.1ng/mL4.2.6.2酶标板8条×12孔，包被有偶联抗原4.2.6.3酶标记物4.2.6.4己烯雌酚抗体临用前将抗体用稀释了的复溶液按1：11倍稀释（50mL

6、抗体加500mL复溶液）成的己烯雌酚抗体溶液4.2.6.5底物溶液A3DB51/T660—20074.2.6.6底物溶液B4.2.6.7浓缩洗涤液临用前用水将其稀释20倍作为洗涤液4.2.6.8浓缩复溶液临用前用水将其稀释5倍作为稀释了的复溶液4.2.6.9终止溶液1.1　仪器和设备1.1.1　酶标仪（配备450nm滤光片）1.1.2　天平感量0.01g1.1.3　分析天平感量0.00001g1.1.4　漩涡混合仪1.1.5　振荡器1.1.6　组织匀浆机1.1.7　冷冻离心机1.1.8　氮吹仪1.1.9　离心管20mL、50mL1.1.10　微量移液器单道20mL，50

7、mL，100mL，1000mL；多道50～250mL1.2　测定步骤1.2.1　试料的制备试料的制备包括：——取绞碎后的供试样品,作为供试试料。——取绞碎后的空白样品,作为空白试料。——取绞碎后空白样品,添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试料。1.2.2　提取和净化 取10000r/min匀浆1min的试料（5±0.05）g，置50mL离心管中，加15mL叔丁基甲基醚，涡旋1min，振荡10min，6000r/min，在-4℃下离心10min，将上层清夜移至鸡心瓶中。再加15mL叔丁基甲基醚同法操作，合并两次上清液，于45℃水浴中减压旋