内皮祖细胞在烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病小鼠模型中作用及机制论文

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：!爱窭日期：兰竺!!年』月三L日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和

2、借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：兰生年三月生日博士学位论文中文摘要摘要第一章小鼠骨髓来源内皮祖细胞分离培养及鉴定目的探讨内皮祖细胞(Endothelialprogenitorcells，EPCs)的培养及鉴定，比较密度梯度离心和全骨髓培养法分离培养EPCs的差异。方法取4周雄性近交系C57BL／6J小鼠骨髓，分别采用密度梯度离心及

3、全骨髓培养法进行培养。相差倒置显微镜观察各组细胞贴壁情况和细胞形态；采用免疫荧光检测细胞摄取Dil—acLDL及结合FITC-UEA．I能力；采用免疫荧光检测细胞血管性血友病因子(vWF)表达，免疫细胞化学检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达及流式细胞术检测细胞表面标志CD34、CDl33和Flk-1的表达。结果(1)全骨髓培养法培养贴壁细胞多数呈长梭形铺展生长，部分细胞呈类圆形及纺锤形；密度梯度离心培养细胞多呈类圆形、纺缍形、梭形或多边形，部分细胞呈线状排列，培养过程中可见典型铺路石样外观及形

4、成血管样结构。(2)密度梯度离心培养摄取Dil．acLDL和结合FITC-UEA—I双阳性率较全骨髓培养法高【(95．34-1．8)％vs．(59．74-8．6)％，P

5、．09+1．62)％vs．(7．58±o．70)％，(18．41±o．97)％vs．博士学位论文中文摘要(5．00_+0．19)％，均P

6、0．87)％。结论(1)密度梯度离心及全骨髓培养法在EGM-2MV培养体系下均可培养出EPCs。(2)密度梯度离心较全骨髓培养法培养的EPCs纯度高。博士学位论文中文摘要第二章慢性阻塞性肺疾病模型的建立与评价目的探讨单纯烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病(Chronicobstructivepulmonarydisease，COPD)小鼠模型建立及病理学、气道炎症、肺功能评价及全身表现。方法16只C57BU6J小鼠随机分为正常对照组及COPD组，每组8只，采用自制烟雾暴露箱进行香烟烟雾暴露，6支／次，4

7、次／d，连续90d，定期检测体重。烟雾暴露90d并观察30d后处理两组小鼠，收集标本。PLY3211小动物肺功能检测系统行小鼠肺功能检查；采用静脉留置针行灌洗术并留取支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞计数及分类计数；肺组织病理切片苏木素．伊红(HE)染色后观察形态学改变并定量测定平均肺泡隔厚度(MAST)、平均内衬间隔(MLI)及肺泡破坏指数(DI)；终点比色法检测血清总抗氧化能力(T-AOC)；骨骼肌组织病理切片苏木素．伊红(腿)染色后观察形态学改变并采用TUNEL法检测骨骼肌凋亡率。争士甲：日

8、7代(1)与正常对照组比较，COPD组小鼠气道阻力(Raw)增高【(1．9l±O．58)crnH20．mL-1．min～VS．(O．22_+0．12)cma20．mL-1．min～，P