《GBT146 43.5-1993-工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定MPN法》.pdf

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1、中华人民共和国国家标准工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定GB/T14643.5一93MPN法Industrialcirculatingcoolingwater-Sulfate-reducingbacteria-MPNtest1主题内容与适用范围本标准规定了工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定方法。本标准适用于工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定，也适用于原水、生活用水及粘泥中硫酸盐还原菌的测定。2引用标准GB603化学试剂试验方法所用制剂及制品的制备GB6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要本法采用多试管发酵技术，在29士1'C培养21d,如果试管内产生黑色沉淀并伴有硫化氢臭味的表明阳

2、性反应，采用MPN技术对被测试样中的硫酸盐还原菌进行计数。4试剂和材料本试验方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB6682中三级水的规格。4.1磷酸氢二钾(HG3-1228);4.2氯化钱(GB658);4.3硫酸钠(GB9853);4.4氯化钙;4.5硫酸镁(GB671),4.6乳酸钠;4.了酵母汁:生化试剂;4.9硫酸亚铁铁(GB661);4.9维生素C;4.10氯化钠(GB1266);4.11氢氧化钠(GB629):40g/L溶液;4.12盐酸(GB622):1+11溶液;4.13硫代硫酸钠(GB637);4.14乙醇(GB678):751(v/V)溶液;4.15牛皮纸;4

3、.16医用脱脂棉。国家技术监督局1993一08一06批准1994一07一01实施cs/T14643.5一935仪器和设备5.1无菌箱(室)或超净工作台;5.2蒸汽压力灭菌器;5.3生化培养箱;5.4电热干燥箱:温度可控制在(60280)士20C;5.5电热恒温水浴锅:恒温范围(37^100)士10C;5.6刻度吸管:1mL;5.7刻度吸管:5mL;5.8试管:150mmX15mm并配上密封的塞子;5.9试管架;5.10刻度三角瓶:500mL;5.11磨口三角瓶:l00mL;5.12磨口试剂瓶:1OOOmL;5.13容量瓶:1OOOmL,6试验前准备6.1无菌水的制备将水分装在100mL磨口

4、三角瓶中，每瓶40mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片来防止粘连，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎，以防污染，用燕汽压力灭菌器121士1℃灭菌15min,6.2培养基的制备6.2.1称取下列试剂:磷酸氢二钾0.5g;氯化按1.Og;硫酸钠0.5g;氯化钙0.1g;硫酸镁2.Og;乳酸钠3.5g;酵母汁1.Og;将上述试剂溶解在1OOOmL水中，用氢氧化钠溶液(4.11)或盐酸溶液(4.12)调节pH至7.2士0.2，并分装在500mL刻度三角瓶中，每瓶不超过350mL，瓶口塞上棉塞，并用牛皮纸包好，用蒸汽压力灭菌器121士1℃灭菌15min,6.2.2硫酸亚铁按溶液:在培养基使用的当夭称取

5、1.2g硫酸亚铁按，在无菌箱(室)内均匀地摊在离紫外线灯30cm处灭菌30min，在无菌操作下，把硫酸亚铁按溶解于事先准备好的无菌水(6-1)中，混匀。6.2.3维生素C溶液:在培养基使用的当天称取0.4g维生素C，在无菌箱(室)内均匀地摊在离紫外线灯30cm处灭菌30min。在无菌操作下，把维生素c溶解于事先准备好的无菌水(6.1)中，混匀。6.2.4在无菌操作下，按每100mL培养基(6.2.1)各加入1.OmL硫酸亚铁按溶液(6.2.2)和1.OmL维生素C溶液(6.2.3),6.3无菌稀释水的制备6.3.，生理盐水的配制:称取s.50g氯化钠溶解在1OOOmL水中，混匀。6.3.2

6、将生理盐水(6.3.1)分装在100mL磨口三角瓶中，每瓶45mL，每个三角瓶塞子和瓶口间插人，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器121士1℃灭菌一小纸片15minGB/T14643.5一936.4刻度吸管的灭菌6.4.1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10-15mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.4.2每支刻度吸管用1条约40-50mm宽的牛皮纸条，以45’左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余纸条折叠打结，不使散开。标上度量，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于160士2C灭菌2ho6.5试管的灭菌

7、将洗净并烘干后的试管塞上密封的塞子，数支一捆，每捆管口用牛皮纸包扎，置电热干燥箱中，于160士2'C灭菌2h,66采样瓶的灭菌将洗净并烘干后的1OOOmL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热干燥箱中，于160士2C灭菌2ho6了硫代硫酸钠灭菌将硫代硫酸钠放在无菌箱(室)内，并均匀地摊在离紫外线灯30cm处灭菌30min,了测定步骤了.1水样的采集7.1.1用无菌采样瓶采集被测样品，在取样过程中，要保护瓶口和颈部