GBT 26322-2010 工业循环冷却水中亚硝化菌的测定MPN法

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1、ICS71．040．40；13．060．70G76圆雪中华人民共和国国家标准GB／T26322—201O工业循环冷却水中亚硝化菌的测定MPN法Examinationofnitritebacteriainindustrialcirculatingcoolingwater——MPNtest2011一O卜04发布2011—12—01实施车瞀粥鬻瓣警矬瞥霎发布中国国家标准化管理委员会议19前言GB／T26322—2010本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由中国石油和化学工业联合会提出。本标准由全国化学标准化技术委员会水处理剂分会(sAc／Tc63／sc5)归口。本标准

2、负责起草单位：中海油天津化工研究设计院、广州市特种承压设备检测研究院。本标准主要起草人：张全、李琳、黎华、滕厚开、杜玉辉。GB／T26322—2010工业循环冷却水中亚硝化菌的测定MPN法1范围本标准规定了工业循环冷却水中亚硝化菌的测定方法。本标准适用于工业循环冷却水中亚硝化菌的测定，也适用于原水、生活用水及黏泥中亚硝化菌的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(GB／T6032002，Is

3、O6353—1：1982，NEQ)GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB／T6682—2008，IsO3696：1987，MOD)3方法提要www.bzfxw.com在28℃～30℃下，恒温培养试样14d后，先采用格里斯氏(Griess)试剂定性判断亚硝化菌的存在。如果溶液呈红色，表明为阳性反应；如果溶液未呈红色，表明为阴性反应。再采用MPN技术对被测试样中的亚硝化菌进行计数。4试剂和材料4．1本标准所用试剂，除非另有规定，应使用分析纯试剂和符合GB／T6682中三级水的规定。试验中所需制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB／T603之规定制备。4．2硫酸铵。4．3

4、碳酸钙。4．4磷酸二氢钠。4．5磷酸氢二钾。4．6硫酸锰(MnS0t·4H。0)。4．7硫酸镁(MgS0t·7Hz0)。4．8对氨基苯磺酸。4．9a萘胺。4．10盐酸溶液：l+11。4．11乙酸溶液(10％)。4．12氢氧化钠溶液：40g／L。www.bzfxw.comGB／T26322—20106．4刻度吸管的灭菌6．4．1将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10mm～15mm，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6．4．2每支刻度吸管用一条约40mm～50mm宽的牛皮纸条，以45。左右螺旋形卷起来，吸管的尖部在头部，粗端将多余的纸条折叠打结，不

5、使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于(160士2)℃灭菌2h。6．5采样瓶的灭菌将洗净并烘干后的l000mL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸包好，扎紧，置电热干燥箱中，于(160±2)℃灭菌2h。7测定步骤7．1将待测试样放人无菌箱(室)中，立即用体积分数为75％的乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱(室)内的酒精灯。试样的稀释和接种操作应在无菌箱(室)内的火焰区进行。7．2用10倍稀释法稀释试样。即用1mL无菌刻度吸管吸取lmL待测试样注入到9mL无菌稀释水管中，充分摇匀，此时稀释度为lo-÷。7．3另取一支1mL无菌刻度吸管吸取1mL稀释度为10_1的试样移到

6、第二个无菌稀释水管中，充分摇匀，此时稀释度为10，以此类推，直至需要的稀释度为止。www.bzfxw.com7．4将水样(包括稀释水样)分别接种于装有培养基的试管中，试管置试管架上，每个稀释度重复接种5管(也可根据需要重复接种3管或4管)，每管接种1mL，每接种一个稀释度更换一支无菌吸管。7．5另取一组试管培养基不接水样，作为空白。7．6培养：在生化培养箱中于28℃～30℃恒温培养14d。8计数与报告8．1取出少量培养液(约5滴)于白色比色瓷板小窝中，依次加入格里斯氏(Griess)试剂A液和B液各两滴(格里斯氏试剂A液和B液应按顺序加入)。如果溶液呈红色，则表示有亚硝化菌存在，以

7、“+”(阳性)表示；如果溶液未呈红色，则表示无亚硝化菌存在，以“一”(阴性)表示。8．2如果空白出现阳性反应，说明测定过程中有污染，本次测定无效。8．3计算出10进位稀释管中阳性试管数，以阳性组合指数记录下来。8．4在10进位稀释中多于3个稀释度时，阳性组合的指数只需要用其中依次的3个稀释度，对这3个www.bzfxw.comGB／T26322—2010表1稀释度、生长情况及阳性试管数报告方式示例阳性组合指数1。。10一·102lO一310一4个／mL++++++++