《GBT16347-1996-乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验》.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB/T16347-1996乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验Microbiologicalexaminationoflacticacidbacteriainyoghurtbeverage1主题内容与适用范围本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料，经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。www.17jzw.com2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3术语乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。www.17b

2、zw.cn乳酸菌菌落总数：检样在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。4设备和材料4.1温箱：36±1℃。4.2冰箱：0~4℃。4.3恒温水浴：46±1℃。4.4电炉：可调式。4.5吸管：容量为www.17jzw.net1，10和25mL。4.6广口瓶或三角瓶：容量为500mL。4.7平皿：直径为9cm。4.8试管：18×180mm。4.9显微镜。5培养基和试剂5.1www.3x888.com改良TJA培养基（改良番茄汁琼脂培养基）。5.2改良MC培养基（ModifiedChalmers培养基）5.30.1%美兰牛乳培养基。5.46.5%氯化钠肉汤。5.5pH9.6葡萄糖肉

3、汤。5.640%胆汁肉汤。5.7淀粉水解培养基。5.8精氨酸水解培养基。5.9乳酸杆菌糖发酵管。5.10七叶苷培养基。5.11革兰氏染色液：按GB4789.28规定执行。标准资料收藏家www.17bzw.cn易启标准网免费提供十万标准书籍资料下载会打字、5分钟快速自助建网站www.17jzw.com易启建站网免费提供建站平台，商业网站1年仅60元www.17jzw.comwww.17bzw.cnwww.17jzw.netwww.3x888.com5.123%过氧化氢溶液：按GB4789.28规定执行。5.13蛋白胨水、靛基质试剂：按GB4789.28规定执行。5.14明胶培养基：按GB478

4、9.28规定执行。5.15硝酸盐培养基、硝酸盐试剂：按GB4789.28规定执行。5.16生理盐水：定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。6乳酸菌菌落总数的测定6.1检验程序乳酸菌菌落总数检验程序如下：检样www.17jzw.com作成几个适当倍数的稀释液选择2~3个适当稀释度，各以1mL之量加入灭菌平皿内每皿内加入适量改良TJA或改良www.17bzw.cnMC培养基36±1℃72±3h菌落计数www.17jzw.net报告6.2操作步骤6.2.1以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL（或25g）放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内作成1:10的均匀稀释液。6.2.2用1mL灭菌吸管吸取

5、1:10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。www.3x888.com6.2.3另取1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1mL灭菌吸管。6.2.4选择2~3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。6.2.5稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基（改良TJA或改良MC）注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1mL稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，以上整

6、个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。6.2.6待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养72±3h取出，观察乳酸菌菌落特征（见表1），选取菌落数在30~300之间的平板进行计数。计算后，随机挑取52上菌落数进标准资料收藏家www.17bzw.cn易启标准网免费提供十万标准书籍资料下载会打字、5分钟快速自助建网站www.17jzw.com易启建站网免费提供建站平台，商业网站1年仅60元行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧化氢酶试验。划兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌少计算出该皿内的乳酸菌数，然后乘其稀释-4倍数即得每毫升样品中

7、乳酸菌数。例如，检样10的稀释液在改良TJA琼脂平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实为乳酸菌的是4个，则1mL检样中乳酸菌数为：44535××10=8.2×1056.3乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生产形态特征见表1。表1乳酸菌在不同培养基上菌落特征改良TJA改良MC杆菌平皿底为黄色，菌落中等大小，微白平皿底为粉红色，菌落较小，圆形，色，湿润，边缘不整齐，直径3±1mm，红色，边缘似星状