根癌农杆菌介导转化atnhx1基因甘蓝型油菜的研究 毕业论文

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1、根癌农杆菌介导转化AtNHX1基因甘蓝型油菜的研究ResearchofAtNHX1GenetransformationinBrassicanapusbyAgrobacteriumtumefaciens所在系（院）：生物化工与环境工程学院学生姓名：指导教师：研究起止日期：二○一一年三月至二○一二年五月二○一二年五月根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化甘蓝型油菜的研究摘要：以甘蓝型油菜带柄子叶为转化受体，通过根癌农杆菌介导法，将Na+/H+逆向转运蛋白AtNHX1基因转入甘蓝型油菜中。结果表明，外植体经浓度OD600为0.4的菌液中侵染8-10min，卡那抗性绿苗率达3.75℅，经过对抗

2、性植株的PCR检测证明外源基因已经整合到油菜基因组中，为提高甘蓝型油菜的耐盐能力提供了新的途径。关键词：根癌农杆菌；带柄子叶；卡那霉素；转基因甘蓝型油菜；17ResearchofAtNHX1GenetransformationinBrassicanapusbyAgrobacteriumtumefaciensAbstract：Chosencotyledonpetioleastherecipientfortransformation.AtNHX1genewastransferredintoBrassicanapusbyAgrobacteriumtumefacienstransferri

3、ngsystem.TheresultsshowedthatthebestphysiologicalandtransformingconditionwasinOD6000.4liquidbacteriumfor8-10min,3.75℅kan-resistantgreenseedingswereobtained.ItwasprovedthatNHXgenewasinsertedintothegenomeofoilseedbythemethodsofPCR.ItcouldprovideanewwaytoimprovethesalttoleranceaboutBrassicanapus.

4、Keywords：Agrobacteriumtumefaciens;Cotyledonswithpetiole;Kanamycn；TransgenicBrassicanapus;目录引言41实验材料51.1植物材料51.2菌种及质粒51.3抗生素51.4培养基的种类51.4.1植物培养基51.4.2细菌培养基51.5农杆菌菌液的制备6172实验方法62.1无菌苗的培养62.2油菜基因型的筛选62.1.2预培养62.1.3分化培养62.1.4继代培养62.1.5生根培养62.1.6再生苗的移出62.3植物表达载体PX6-AtNHX1转化甘蓝型油菜62.3.1预培养62.3.2外植体的

5、侵染72.3.3共培养72.3.4筛选培养72.3.5继代培养72.3.6抗性苗的获得72.3.7生根培养72.4转基因植株的检测72.4.1甘蓝型油菜DNA的提取72.4.2PCR基因扩增82.4.3基因条带的检测93实验结果93.1不同基因型对甘蓝型油菜外植体分化率的影响93.2芽苗的生根培养103.3再生苗的移出113.4植物表达载体PX6-AtNHX1转化得到的油菜123.5芽增殖的培养143.6转基因甘蓝型油菜的检测结果144讨论15参考文献：17致谢18引言土壤盐渍化对农业的威胁是一个全球性问题，土壤盐渍化严重影响着农业的产量，尤其是使灌溉农业作物减产。同时盐分过高还可

6、使土壤盐渍化，限制土壤的利用。目前，世界上大约20%的耕种土地和接近一半的灌溉土地都遭到了盐胁迫的危害[1]。高盐环境是影响植物生长和发育的主要环境因子之一。分子生物学的发展，使人们能够在基因组成、表达调控及信号传导等分子水平上认识植物对盐逆境胁迫的耐(抗)性机理，从而通过基因工程手段改良植物耐(抗)盐性。17随着分子遗传学和植物转基因技术的快速发展，采用生物技术提高作物的耐盐性，使作物在盐胁迫环境中能够正常生长并提高产量，正受到越来越多的关注，并取得了一定的成果。提高作物耐盐性的方法有很多，如改造生物合成途径，在作物体内表达耐盐相关基因或改变基因对胁迫的反应特性等[2-3]。NH

7、X（Na+/H+antiporter）为液泡膜中的一种Na+/H+反向运输体[4]，可促进离子在液泡中的分室效应，同时还可减少细胞毒性。在转基因拟南芥和转基因西红柿中过量表达AtNHX1，可在液泡膜中积累大量的运输体，并且极大地提高了它们的耐盐性[5,6]。这些结果显示出AtNHX家族在钠离子的液泡分室效应中起着关键的作用。油菜是我国主要的油料作物之一，随着农业生物技术的发展，人们越来越重视基因工程技术改良油菜品种，成功的基因转化主要依赖于良好的植物受体系统的建立。从